中国家禽
中國傢禽
중국가금
CHINA POULTRY
2012年
20期
18-22
,共5页
张亚妮%任丽伟%李伟%徐琪%高波%王霄燕%李碧春
張亞妮%任麗偉%李偉%徐琪%高波%王霄燕%李碧春
장아니%임려위%리위%서기%고파%왕소연%리벽춘
流感病毒%NA%新城疫病毒%抗病毒活性
流感病毒%NA%新城疫病毒%抗病毒活性
류감병독%NA%신성역병독%항병독활성
本研究利用神经氨酸酶(Neuramidinase,NA)可诱导机体产生特异性抗体,抑制流感病毒从已感染的细胞释放减少病毒增殖的特点,探索NA基因用于研制抗病转基因家禽的新思路.通过构建NA基因真核表达载体pcDNA3.0-NA和pcDNA3.0/EGFP-NA,转染NIH 3T3细胞后对NA基因进行亚细胞定位研究；用pcDNA3.0-NA转染鸡胚成纤维细胞(CEF),接种新城疫病毒(NDV)后观察CEF细胞形态,研究NA基因抗病毒能力；用pcDNA3.0-NA转染NIH 3T3细胞后提取细胞裂解液,纯化NA蛋白,以不同浓度倍比稀释后,加至铺满单层CEF细胞的96孔板,37℃孵育24h,弃去上清,接种NDV,采用微量细胞病变抑制法研究NA基因的抗病毒活性；间接免疫荧光试验和EGFP融合表达结果显示,NA蛋白定位于细胞质；NDV-CEF细胞病变抑制试验表明重组的NA蛋白具有较强的抗NDV生物活性.
本研究利用神經氨痠酶(Neuramidinase,NA)可誘導機體產生特異性抗體,抑製流感病毒從已感染的細胞釋放減少病毒增殖的特點,探索NA基因用于研製抗病轉基因傢禽的新思路.通過構建NA基因真覈錶達載體pcDNA3.0-NA和pcDNA3.0/EGFP-NA,轉染NIH 3T3細胞後對NA基因進行亞細胞定位研究；用pcDNA3.0-NA轉染鷄胚成纖維細胞(CEF),接種新城疫病毒(NDV)後觀察CEF細胞形態,研究NA基因抗病毒能力；用pcDNA3.0-NA轉染NIH 3T3細胞後提取細胞裂解液,純化NA蛋白,以不同濃度倍比稀釋後,加至鋪滿單層CEF細胞的96孔闆,37℃孵育24h,棄去上清,接種NDV,採用微量細胞病變抑製法研究NA基因的抗病毒活性；間接免疫熒光試驗和EGFP融閤錶達結果顯示,NA蛋白定位于細胞質；NDV-CEF細胞病變抑製試驗錶明重組的NA蛋白具有較彊的抗NDV生物活性.
본연구이용신경안산매(Neuramidinase,NA)가유도궤체산생특이성항체,억제류감병독종이감염적세포석방감소병독증식적특점,탐색NA기인용우연제항병전기인가금적신사로.통과구건NA기인진핵표체재체pcDNA3.0-NA화pcDNA3.0/EGFP-NA,전염NIH 3T3세포후대NA기인진행아세포정위연구；용pcDNA3.0-NA전염계배성섬유세포(CEF),접충신성역병독(NDV)후관찰CEF세포형태,연구NA기인항병독능력；용pcDNA3.0-NA전염NIH 3T3세포후제취세포렬해액,순화NA단백,이불동농도배비희석후,가지포만단층CEF세포적96공판,37℃부육24h,기거상청,접충NDV,채용미량세포병변억제법연구NA기인적항병독활성；간접면역형광시험화EGFP융합표체결과현시,NA단백정위우세포질；NDV-CEF세포병변억제시험표명중조적NA단백구유교강적항NDV생물활성.
