CAJ | 학술논문

目的构建小鼠IL-12单链融合基因(msIL-12),进行基因治疗初探. 方法用RT-PCR法从小鼠腹腔巨噬细胞总RNA分别获取p40cDNA和p35cDNA,2次PCR引入linker后,依次克隆入pcDNA3质粒,构建成msIL-12真核表达质粒(pmsIL-12);用DEAE-dextran法将PEG纯化的pmsIL-12转染COS-7细胞,用ELISA法检测其培养上清(转染上清)IL-12蛋白含量.皮内注射PEG纯化的pmsIL-12,用MTT法检测其对正常小鼠脾细胞NK活性的影响,观察其对荷H22腹水型肝癌细胞瘤小鼠生存期的影响. 结果所得p35cDNA序列与GenBank登录号M86672完全一致;所得IL-12p40cDNA序列与GenBank登录号AH004859报道完全相同,除第1000位碱基是G而不是A(但所编码氨基酸相同,都是丝氨酸)外也与GenBank登录号M86671报道相同.成功构建了小鼠IL-12单链融合基因真核表达质粒pmsIL-12,其转染COS-7细胞后的转染上清IL-12蛋白含量达(2.55±0.60)ng/ml.皮内注射pmsIL-12后,使正常小鼠脾细胞NK活性显著增强(P＜0.01),使荷H22肝癌细胞瘤小鼠的生存期明显延长(P＜0.05). 结论构建了小鼠IL-12单链融合基因的真核表达质粒,可用于基因治疗研究.
목적구건소서IL-12단련융합기인(msIL-12),진행기인치료초탐. 방법용RT-PCR법종소서복강거서세포총RNA분별획취p40cDNA화p35cDNA,2차PCR인입linker후,의차극륭입pcDNA3질립,구건성msIL-12진핵표체질립(pmsIL-12);용DEAE-dextran법장PEG순화적pmsIL-12전염COS-7세포,용ELISA법검측기배양상청(전염상청)IL-12단백함량.피내주사PEG순화적pmsIL-12,용MTT법검측기대정상소서비세포NK활성적영향,관찰기대하H22복수형간암세포류소서생존기적영향. 결과소득p35cDNA서렬여GenBank등록호M86672완전일치;소득IL-12p40cDNA서렬여GenBank등록호AH004859보도완전상동,제제1000위감기시G이불시A(단소편마안기산상동,도시사안산)외야여GenBank등록호M86671보도상동.성공구건료소서IL-12단련융합기인진핵표체질립pmsIL-12,기전염COS-7세포후적전염상청IL-12단백함량체(2.55±0.60)ng/ml.피내주사pmsIL-12후,사정상소서비세포NK활성현저증강(P＜0.01),사하H22간암세포류소서적생존기명현연장(P＜0.05). 결론구건료소서IL-12단련융합기인적진핵표체질립,가용우기인치료연구.