CAJ | 학술논문

目的寻找识别新的肿瘤相关粘蛋白抗原的单抗,为阐明胃肠癌粘液糖蛋白的表达规律进而为胃肠肿瘤的预后、分型等提供参考依据.方法以牛颌下腺粘蛋白(BSM)为免疫原免疫小鼠,以免疫脾细胞与Sp2/0细胞融合建立杂交瘤细胞株,用有限稀释法克隆化,间接ELISA及间接ELISA结合神经氨酸酶消化筛选克隆.以聚丙烯酰胺凝胶电泳,免疫印记(Western-Blot),间接ELISA结合热处理、胰蛋白酶消化、过碘酸氧化以及稀碱处理去除O-乙酰基等方法进行抗体的鉴定.以免疫组化LSAB法观察两株抗体对68例胃癌和55例肠癌粘蛋白糖链抗原的标记情况.结果两株抗体分别命名为5E2和6C10,Western-Blot显示两株抗体均只与分子量大于220kDa的PAS染色阳性条带反应.两株单抗与BSM的反应都对热处理、胰蛋白酶消化、过碘酸氧化、神经氨酸酶消化等处理敏感.5E2还对稀碱去除O-乙酰基敏感,6C10可以部分吸收sialyl-lewisa.单抗6C10在早期胃癌及癌旁的阳性率分别为5.5%和52.9%,进展癌及其癌旁的阳性率分别为14.0%和22.9%;在结肠癌及其癌旁的阳性率分别为30.9%和83.8%.单抗5E2在胃早期癌及其癌旁的阳性率分别为16.7%和41.2%,在进展癌及其癌旁的阳性率分别为42.0%和37.5%;在肠癌及其癌旁的阳性率分别为69.1%和91.9%.结论初步认为单抗5E2和6C10是两株以不同的唾液酸化多糖为抗原表位的单抗,单抗5E2可以用于研究肠癌O-乙酰化唾液酸的组织分布,单抗6C10有望成为研究胃自然史中粘蛋白表达规律及其应用的新工具.
목적심조식별신적종류상관점단백항원적단항,위천명위장암점액당단백적표체규률진이위위장종류적예후、분형등제공삼고의거.방법이우합하선점단백(BSM)위면역원면역소서,이면역비세포여Sp2/0세포융합건립잡교류세포주,용유한희석법극륭화,간접ELISA급간접ELISA결합신경안산매소화사선극륭.이취병희선알응효전영,면역인기(Western-Blot),간접ELISA결합열처리、이단백매소화、과전산양화이급희감처리거제O-을선기등방법진행항체적감정.이면역조화LSAB법관찰량주항체대68례위암화55례장암점단백당련항원적표기정황.결과량주항체분별명명위5E2화6C10,Western-Blot현시량주항체균지여분자량대우220kDa적PAS염색양성조대반응.량주단항여BSM적반응도대열처리、이단백매소화、과전산양화、신경안산매소화등처리민감.5E2환대희감거제O-을선기민감,6C10가이부분흡수sialyl-lewisa.단항6C10재조기위암급암방적양성솔분별위5.5%화52.9%,진전암급기암방적양성솔분별위14.0%화22.9%;재결장암급기암방적양성솔분별위30.9%화83.8%.단항5E2재위조기암급기암방적양성솔분별위16.7%화41.2%,재진전암급기암방적양성솔분별위42.0%화37.5%;재장암급기암방적양성솔분별위69.1%화91.9%.결론초보인위단항5E2화6C10시량주이불동적타액산화다당위항원표위적단항,단항5E2가이용우연구장암O-을선화타액산적조직분포,단항6C10유망성위연구위자연사중점단백표체규률급기응용적신공구.