中国生物化学与分子生物学报
中國生物化學與分子生物學報
중국생물화학여분자생물학보
CHINESE JOURNAL OF BIOCHEMISTRY AND MOLECULAR BIOLOGY
2001年
4期
506-509
,共4页
白晓阳%季朝能%姜涛%盛小禹%毛裕民
白曉暘%季朝能%薑濤%盛小禹%毛裕民
백효양%계조능%강도%성소우%모유민
耐热碱性磷酸酶%磷酸盐%热稳定性
耐熱堿性燐痠酶%燐痠鹽%熱穩定性
내열감성린산매%린산염%열은정성
为研究体外磷酸根离子对嗜热菌(Thermus sp.3041)碱性磷酸酶TAPND27耐热性的影响,通过克隆于高表达质粒上编码TAPND27的基因在E.coli中的诱导表达和蛋白产物的纯化,获得了电泳纯的TAPND27.耐热性实验表明磷酸根离子能显著提高该酶的热稳定性,在10 mmol/L磷酸根离子存在下,TAPND27的Tm值从91℃上升到了97℃;酶的动力学实验证实无机磷酸盐(Pi)对TAP-ND27的酶活性有可逆竞争性抑制作用,Ki值为0.99×10-4mol/L.上述结果说明,TAPND27耐热性的提高是由于磷酸根离子对TAPND27活性位点的竞争性结合,这种结合,推测为Pi与氨基酸残基间的非共价相互作用,减小了TAPND27的自由能,从而提高了它的热稳定性.
為研究體外燐痠根離子對嗜熱菌(Thermus sp.3041)堿性燐痠酶TAPND27耐熱性的影響,通過剋隆于高錶達質粒上編碼TAPND27的基因在E.coli中的誘導錶達和蛋白產物的純化,穫得瞭電泳純的TAPND27.耐熱性實驗錶明燐痠根離子能顯著提高該酶的熱穩定性,在10 mmol/L燐痠根離子存在下,TAPND27的Tm值從91℃上升到瞭97℃;酶的動力學實驗證實無機燐痠鹽(Pi)對TAP-ND27的酶活性有可逆競爭性抑製作用,Ki值為0.99×10-4mol/L.上述結果說明,TAPND27耐熱性的提高是由于燐痠根離子對TAPND27活性位點的競爭性結閤,這種結閤,推測為Pi與氨基痠殘基間的非共價相互作用,減小瞭TAPND27的自由能,從而提高瞭它的熱穩定性.
위연구체외린산근리자대기열균(Thermus sp.3041)감성린산매TAPND27내열성적영향,통과극륭우고표체질립상편마TAPND27적기인재E.coli중적유도표체화단백산물적순화,획득료전영순적TAPND27.내열성실험표명린산근리자능현저제고해매적열은정성,재10 mmol/L린산근리자존재하,TAPND27적Tm치종91℃상승도료97℃;매적동역학실험증실무궤린산염(Pi)대TAP-ND27적매활성유가역경쟁성억제작용,Ki치위0.99×10-4mol/L.상술결과설명,TAPND27내열성적제고시유우린산근리자대TAPND27활성위점적경쟁성결합,저충결합,추측위Pi여안기산잔기간적비공개상호작용,감소료TAPND27적자유능,종이제고료타적열은정성.
