CAJ | 학술논문

目的构建华支睾吸虫成虫RNA聚合酶Ⅱ延长因子(RPEF)基因PET重组质粒,分析其编码序列.方法根据RPEF基因已知序列设计一对引物,用PCR技术从华支睾吸虫质粒文库模板中扩增RPEF基因片段;将目的基因PCR产物和空质粒PET30a(+)同时用BamH Ⅰ和Sal Ⅰ限制性内切酶双酶切,纯化回收后建立连接反应并转化大肠杆菌BL21.将构建的重组质粒PET30a(+)-RPEF经双酶切、PCR、测序鉴定后证明获得正确的重组克隆.结果成功构建出RPEF基因原核重组质粒PET30a(+)-RPEF.序列分析表明,RPEF蛋白与鼠类RNApolymerase Ⅱ延长因子具有很高的同源性.结论RPEF基因在华支睾吸虫基因表达调控机制中可能起重要作用.RPEF基因重组表达载体PET30a(+)-RPEF的成功构建可为更深入地分析其基因功能、肝吸虫病药物靶标的筛选奠定基础.
목적구건화지고흡충성충RNA취합매Ⅱ연장인자(RPEF)기인PET중조질립,분석기편마서렬.방법근거RPEF기인이지서렬설계일대인물,용PCR기술종화지고흡충질립문고모판중확증RPEF기인편단;장목적기인PCR산물화공질립PET30a(+)동시용BamH Ⅰ화Sal Ⅰ한제성내절매쌍매절,순화회수후건립련접반응병전화대장간균BL21.장구건적중조질립PET30a(+)-RPEF경쌍매절、PCR、측서감정후증명획득정학적중조극륭.결과성공구건출RPEF기인원핵중조질립PET30a(+)-RPEF.서렬분석표명,RPEF단백여서류RNApolymerase Ⅱ연장인자구유흔고적동원성.결론RPEF기인재화지고흡충기인표체조공궤제중가능기중요작용.RPEF기인중조표체재체PET30a(+)-RPEF적성공구건가위경심입지분석기기인공능、간흡충병약물파표적사선전정기출.