中国兽医学报
中國獸醫學報
중국수의학보
CHINESE JOURNAL OF VETERINARY SCIENCE
2009年
4期
441-444
,共4页
王林锋%杨宏军%杨少华%王长法%高运东%钟跻峰%葛利江
王林鋒%楊宏軍%楊少華%王長法%高運東%鐘躋峰%葛利江
왕림봉%양굉군%양소화%왕장법%고운동%종제봉%갈리강
大肠杆菌%curli菌毛%csgC基因%表达
大腸桿菌%curli菌毛%csgC基因%錶達
대장간균%curli균모%csgC기인%표체
根据GenBank上发表的curli菌毛csgC基因序列设计了1对特异性引物.从患乳腺炎的奶牛乳汁中分离出致病性大肠杆菌,经生物学鉴定后,提取全基因组DNA为模板,PCR扩增出csgC基因,连入pMD18-T克隆载体,测序,结果表明,扩增片段含有333个核苷酸,编码111个氨基酸的成熟蛋白,与已报道的大肠杆菌W3110的全基因组DNA中的csgC基因序列最相近,氨基酸序列同源性为99.7%.该基因与原核表达载体pET32a+相连,转入BL21(DE3)感受态细胞.挑选阳性菌落经PCR鉴定和酶切鉴定后表明成功构建原核表达载体pET32a+/csgC.
根據GenBank上髮錶的curli菌毛csgC基因序列設計瞭1對特異性引物.從患乳腺炎的奶牛乳汁中分離齣緻病性大腸桿菌,經生物學鑒定後,提取全基因組DNA為模闆,PCR擴增齣csgC基因,連入pMD18-T剋隆載體,測序,結果錶明,擴增片段含有333箇覈苷痠,編碼111箇氨基痠的成熟蛋白,與已報道的大腸桿菌W3110的全基因組DNA中的csgC基因序列最相近,氨基痠序列同源性為99.7%.該基因與原覈錶達載體pET32a+相連,轉入BL21(DE3)感受態細胞.挑選暘性菌落經PCR鑒定和酶切鑒定後錶明成功構建原覈錶達載體pET32a+/csgC.
근거GenBank상발표적curli균모csgC기인서렬설계료1대특이성인물.종환유선염적내우유즙중분리출치병성대장간균,경생물학감정후,제취전기인조DNA위모판,PCR확증출csgC기인,련입pMD18-T극륭재체,측서,결과표명,확증편단함유333개핵감산,편마111개안기산적성숙단백,여이보도적대장간균W3110적전기인조DNA중적csgC기인서렬최상근,안기산서렬동원성위99.7%.해기인여원핵표체재체pET32a+상련,전입BL21(DE3)감수태세포.도선양성균락경PCR감정화매절감정후표명성공구건원핵표체재체pET32a+/csgC.
