山东大学学报（医学版）
山東大學學報（醫學版）
산동대학학보（의학판）
JOURNAL OF SHANDONG UNIVERSITY(HEALTH SCIENCES)
2006年
12期
1189-1193
,共5页
吕慧%赵蔚明%于修平%郑燕%王红%周亚滨%齐眉%于晗%杨熙
呂慧%趙蔚明%于脩平%鄭燕%王紅%週亞濱%齊眉%于晗%楊熙
려혜%조위명%우수평%정연%왕홍%주아빈%제미%우함%양희
衣原体,沙眼%重组腺病毒%基因,Major outer membrane protein%小鼠,近交BALB C
衣原體,沙眼%重組腺病毒%基因,Major outer membrane protein%小鼠,近交BALB C
의원체,사안%중조선병독%기인,Major outer membrane protein%소서,근교BALB C
目的:构建E型沙眼衣原体(Ct)主要外膜蛋白(MOMP)基因重组腺病毒,为沙眼衣原体腺病毒疫苗的研究奠定基础.方法:根据Genebank中E型Ct MOMP基因序列设计引物,用高保真PCR方法从E型Ct基因组DNA中扩增得到MOMP基因片段,克隆至pcDNAⅡ载体,测序后连接入腺病毒穿梭载体pDC316.穿梭载体pDC316-MOMP与含腺病毒基因组的辅助质粒PBHGlox△E1,3Cre共转染至HEK293细胞,在CreloxP重组酶作用下进行重组,包装成重组腺病毒颗粒,用PCR和RT-PCR方法进行鉴定.并用动物免疫试验检测重组腺病毒的免疫原性.结果:从E型Ct基因组DNA中扩增出约1.1 kb的特异MOMP基因片段,酶切鉴定及DNA序列测定证实穿梭载体pDC316-MOMP构建正确.穿梭载体pDC316-MOMP与含腺病毒基因组的辅助质粒PBHGlox△E1,3Cre共转染至293细胞,出现明显细胞病变效应.收集重组腺病毒,PCR法证实重组腺病毒含有MOMP基因,RT-PCR证实重组腺病毒在293细胞能表达MOMP基因.重组腺病毒免疫小鼠可诱导特异性抗体产生,证明重组腺病毒具有良好免疫原性.结论:成功构建了E型沙眼衣原体MOMP基因重组腺病毒,该重组腺病毒可诱导小鼠产生特异性抗体.
目的:構建E型沙眼衣原體(Ct)主要外膜蛋白(MOMP)基因重組腺病毒,為沙眼衣原體腺病毒疫苗的研究奠定基礎.方法:根據Genebank中E型Ct MOMP基因序列設計引物,用高保真PCR方法從E型Ct基因組DNA中擴增得到MOMP基因片段,剋隆至pcDNAⅡ載體,測序後連接入腺病毒穿梭載體pDC316.穿梭載體pDC316-MOMP與含腺病毒基因組的輔助質粒PBHGlox△E1,3Cre共轉染至HEK293細胞,在CreloxP重組酶作用下進行重組,包裝成重組腺病毒顆粒,用PCR和RT-PCR方法進行鑒定.併用動物免疫試驗檢測重組腺病毒的免疫原性.結果:從E型Ct基因組DNA中擴增齣約1.1 kb的特異MOMP基因片段,酶切鑒定及DNA序列測定證實穿梭載體pDC316-MOMP構建正確.穿梭載體pDC316-MOMP與含腺病毒基因組的輔助質粒PBHGlox△E1,3Cre共轉染至293細胞,齣現明顯細胞病變效應.收集重組腺病毒,PCR法證實重組腺病毒含有MOMP基因,RT-PCR證實重組腺病毒在293細胞能錶達MOMP基因.重組腺病毒免疫小鼠可誘導特異性抗體產生,證明重組腺病毒具有良好免疫原性.結論:成功構建瞭E型沙眼衣原體MOMP基因重組腺病毒,該重組腺病毒可誘導小鼠產生特異性抗體.
목적:구건E형사안의원체(Ct)주요외막단백(MOMP)기인중조선병독,위사안의원체선병독역묘적연구전정기출.방법:근거Genebank중E형Ct MOMP기인서렬설계인물,용고보진PCR방법종E형Ct기인조DNA중확증득도MOMP기인편단,극륭지pcDNAⅡ재체,측서후련접입선병독천사재체pDC316.천사재체pDC316-MOMP여함선병독기인조적보조질립PBHGlox△E1,3Cre공전염지HEK293세포,재CreloxP중조매작용하진행중조,포장성중조선병독과립,용PCR화RT-PCR방법진행감정.병용동물면역시험검측중조선병독적면역원성.결과:종E형Ct기인조DNA중확증출약1.1 kb적특이MOMP기인편단,매절감정급DNA서렬측정증실천사재체pDC316-MOMP구건정학.천사재체pDC316-MOMP여함선병독기인조적보조질립PBHGlox△E1,3Cre공전염지293세포,출현명현세포병변효응.수집중조선병독,PCR법증실중조선병독함유MOMP기인,RT-PCR증실중조선병독재293세포능표체MOMP기인.중조선병독면역소서가유도특이성항체산생,증명중조선병독구유량호면역원성.결론:성공구건료E형사안의원체MOMP기인중조선병독,해중조선병독가유도소서산생특이성항체.
