中华肿瘤防治杂志
中華腫瘤防治雜誌
중화종류방치잡지
CHINESE JOURNAL OF CANCER PREVENTION AND TREATMENT
2007年
3期
202-204,219
,共4页
乳腺肿瘤/遗传学%肿瘤细胞,培养的%基因,MDR%基因表达%逆转录聚合酶链反应%荧光
乳腺腫瘤/遺傳學%腫瘤細胞,培養的%基因,MDR%基因錶達%逆轉錄聚閤酶鏈反應%熒光
유선종류/유전학%종류세포,배양적%기인,MDR%기인표체%역전록취합매련반응%형광
目的:建立用实时荧光定量RT-PCR法在mRNA水平上检测肿瘤细胞中多药耐药基因(mdr-1基因)表达的方法.方法:利用RT-PCR方法从耐药肿瘤细胞MCF-7/ADR中扩增出目的基因片段,用TA克隆的方法将基因片段插入到PGEM-T质粒载体中,在Line-gene 荧光定量检测系统上建立检测mdr-1基因表达的标准曲线.结果:成功构建了mdr-1基因的质粒重组子,建立了在mRNA水平定量检测mdr-1基因的标准曲线,相关系数为0.997,可稳定检测出40 μL体系中102拷贝数的模板.重复5次实验组内和组间变异系数均＜1.0%.结论:用基因克隆法可快速准确地构建mdr-1基因的标准曲线,定量检测mdr-1基因的表达,简单易行,重现性好.
目的:建立用實時熒光定量RT-PCR法在mRNA水平上檢測腫瘤細胞中多藥耐藥基因(mdr-1基因)錶達的方法.方法:利用RT-PCR方法從耐藥腫瘤細胞MCF-7/ADR中擴增齣目的基因片段,用TA剋隆的方法將基因片段插入到PGEM-T質粒載體中,在Line-gene 熒光定量檢測繫統上建立檢測mdr-1基因錶達的標準麯線.結果:成功構建瞭mdr-1基因的質粒重組子,建立瞭在mRNA水平定量檢測mdr-1基因的標準麯線,相關繫數為0.997,可穩定檢測齣40 μL體繫中102拷貝數的模闆.重複5次實驗組內和組間變異繫數均＜1.0%.結論:用基因剋隆法可快速準確地構建mdr-1基因的標準麯線,定量檢測mdr-1基因的錶達,簡單易行,重現性好.
목적:건립용실시형광정량RT-PCR법재mRNA수평상검측종류세포중다약내약기인(mdr-1기인)표체적방법.방법:이용RT-PCR방법종내약종류세포MCF-7/ADR중확증출목적기인편단,용TA극륭적방법장기인편단삽입도PGEM-T질립재체중,재Line-gene 형광정량검측계통상건립검측mdr-1기인표체적표준곡선.결과:성공구건료mdr-1기인적질립중조자,건립료재mRNA수평정량검측mdr-1기인적표준곡선,상관계수위0.997,가은정검측출40 μL체계중102고패수적모판.중복5차실험조내화조간변이계수균＜1.0%.결론:용기인극륭법가쾌속준학지구건mdr-1기인적표준곡선,정량검측mdr-1기인적표체,간단역행,중현성호.
