蚕业科学
蠶業科學
잠업과학
ACTA SERICOLOGICA SINICA
2011年
2期
246-253
,共8页
杨莹%王成林%徐家萍%尤征英%凌琳%周敬波
楊瑩%王成林%徐傢萍%尤徵英%凌琳%週敬波
양형%왕성림%서가평%우정영%릉림%주경파
家蚕%果蝇%抗菌肽%Cecropin B%原核表达%抗菌活性%基因结构
傢蠶%果蠅%抗菌肽%Cecropin B%原覈錶達%抗菌活性%基因結構
가잠%과승%항균태%Cecropin B%원핵표체%항균활성%기인결구
动物抗菌肽天蚕素(cecropin)因具有抗菌谱广、活性较强、不易产生耐药性等特点而成为新型抗菌剂开发的材料.为了探讨通过原核表达的途径高效获取天然cecropin,以重叠PCR方法分别人工合成家蚕(Bombyx mori)和果蝇(Drosophila melanogaster)的抗菌肽cecropin B基因(CecB2)并克隆至T载体,测序确认后分别克隆至pET-32a载体,转化至E.coli BL21(DE3)宿主菌进行表达.通过SDS-PAGE和Western blotting检测到2种目的蛋白均得到表达,但表达量存在差异,Bradford法测定纯化后的BmCecB2融合蛋白和DmCecB2融合蛋白的质量浓度分别为0.6、2.0 mg/mL.经Ni-NTA亲和层析纯化和透析处理后的2种产物的抗菌活性存在明显差异:DmCecB2和BmCecB2的质量浓度为10 mg/mL时,对E.coli DH5α的抑菌圈直径分别为15、8 mm左右,最小抑菌浓度分别为0.05、0.10 ms/mL.以上结果说明DmCecbB2的原核表达效率及表达产物的抑菌活性均明显高于BmCecB2.用生物信息学方法分析家蚕和果蝇的CecB2蛋白在结构上存在差异,这可能是导致2种产物活性不同的主要原因.
動物抗菌肽天蠶素(cecropin)因具有抗菌譜廣、活性較彊、不易產生耐藥性等特點而成為新型抗菌劑開髮的材料.為瞭探討通過原覈錶達的途徑高效穫取天然cecropin,以重疊PCR方法分彆人工閤成傢蠶(Bombyx mori)和果蠅(Drosophila melanogaster)的抗菌肽cecropin B基因(CecB2)併剋隆至T載體,測序確認後分彆剋隆至pET-32a載體,轉化至E.coli BL21(DE3)宿主菌進行錶達.通過SDS-PAGE和Western blotting檢測到2種目的蛋白均得到錶達,但錶達量存在差異,Bradford法測定純化後的BmCecB2融閤蛋白和DmCecB2融閤蛋白的質量濃度分彆為0.6、2.0 mg/mL.經Ni-NTA親和層析純化和透析處理後的2種產物的抗菌活性存在明顯差異:DmCecB2和BmCecB2的質量濃度為10 mg/mL時,對E.coli DH5α的抑菌圈直徑分彆為15、8 mm左右,最小抑菌濃度分彆為0.05、0.10 ms/mL.以上結果說明DmCecbB2的原覈錶達效率及錶達產物的抑菌活性均明顯高于BmCecB2.用生物信息學方法分析傢蠶和果蠅的CecB2蛋白在結構上存在差異,這可能是導緻2種產物活性不同的主要原因.
동물항균태천잠소(cecropin)인구유항균보엄、활성교강、불역산생내약성등특점이성위신형항균제개발적재료.위료탐토통과원핵표체적도경고효획취천연cecropin,이중첩PCR방법분별인공합성가잠(Bombyx mori)화과승(Drosophila melanogaster)적항균태cecropin B기인(CecB2)병극륭지T재체,측서학인후분별극륭지pET-32a재체,전화지E.coli BL21(DE3)숙주균진행표체.통과SDS-PAGE화Western blotting검측도2충목적단백균득도표체,단표체량존재차이,Bradford법측정순화후적BmCecB2융합단백화DmCecB2융합단백적질량농도분별위0.6、2.0 mg/mL.경Ni-NTA친화층석순화화투석처리후적2충산물적항균활성존재명현차이:DmCecB2화BmCecB2적질량농도위10 mg/mL시,대E.coli DH5α적억균권직경분별위15、8 mm좌우,최소억균농도분별위0.05、0.10 ms/mL.이상결과설명DmCecbB2적원핵표체효솔급표체산물적억균활성균명현고우BmCecB2.용생물신식학방법분석가잠화과승적CecB2단백재결구상존재차이,저가능시도치2충산물활성불동적주요원인.
