华北农学报
華北農學報
화북농학보
ACTA AGRICULTURAE BOREALI-SINICA
2011年
5期
92-96
,共5页
侯小改%王娟%贾甜%张钰乾%侯娟%李嘉珏
侯小改%王娟%賈甜%張鈺乾%侯娟%李嘉玨
후소개%왕연%가첨%장옥건%후연%리가각
牡丹%SCoT-PCR%反应体系%正交设计%引物筛选
牡丹%SCoT-PCR%反應體繫%正交設計%引物篩選
모단%SCoT-PCR%반응체계%정교설계%인물사선
以牡丹基因组DNA为模板,采用L16(45)正交试验设计对影响目标起始密码子多态性-聚合酶链式反应( SCoT-PCR)的五因素(Taq酶用量、Mg2+浓度、模板DNA用量、dNTPs浓度和引物浓度)进行优化试验,建立了优化的牡丹SCoT-PCR反应体系:Mg2+ 2.50 mmol/L、dNTPs 0.25 mmol/L、引物0.60 μmol/L、Taq DNA聚合酶0.50 U、模板DNA 1.00 ng/μL,1×PCR-Buffer,总体积20.00 μL.比较各因素对扩增反应的结果,其中以Mg2+浓度的影响最大,DNA模板用量的影响最小.运用牡丹17个品种验证了该体系稳定可靠,并从36个SCoT引物中筛选出扩增条带清晰、多态性丰富的24个引物.这一体系的建立及多态性引物的筛选为今后利用SCoT标记技术对牡丹进行相关研究提供了科学依据.
以牡丹基因組DNA為模闆,採用L16(45)正交試驗設計對影響目標起始密碼子多態性-聚閤酶鏈式反應( SCoT-PCR)的五因素(Taq酶用量、Mg2+濃度、模闆DNA用量、dNTPs濃度和引物濃度)進行優化試驗,建立瞭優化的牡丹SCoT-PCR反應體繫:Mg2+ 2.50 mmol/L、dNTPs 0.25 mmol/L、引物0.60 μmol/L、Taq DNA聚閤酶0.50 U、模闆DNA 1.00 ng/μL,1×PCR-Buffer,總體積20.00 μL.比較各因素對擴增反應的結果,其中以Mg2+濃度的影響最大,DNA模闆用量的影響最小.運用牡丹17箇品種驗證瞭該體繫穩定可靠,併從36箇SCoT引物中篩選齣擴增條帶清晰、多態性豐富的24箇引物.這一體繫的建立及多態性引物的篩選為今後利用SCoT標記技術對牡丹進行相關研究提供瞭科學依據.
이모단기인조DNA위모판,채용L16(45)정교시험설계대영향목표기시밀마자다태성-취합매련식반응( SCoT-PCR)적오인소(Taq매용량、Mg2+농도、모판DNA용량、dNTPs농도화인물농도)진행우화시험,건립료우화적모단SCoT-PCR반응체계:Mg2+ 2.50 mmol/L、dNTPs 0.25 mmol/L、인물0.60 μmol/L、Taq DNA취합매0.50 U、모판DNA 1.00 ng/μL,1×PCR-Buffer,총체적20.00 μL.비교각인소대확증반응적결과,기중이Mg2+농도적영향최대,DNA모판용량적영향최소.운용모단17개품충험증료해체계은정가고,병종36개SCoT인물중사선출확증조대청석、다태성봉부적24개인물.저일체계적건립급다태성인물적사선위금후이용SCoT표기기술대모단진행상관연구제공료과학의거.
