CAJ | 학술논문

卵母细胞成熟和母源型-合子型过渡过程中,存在大量基因的表达差异,使得应用mRNA差异显示(DDRT-PCR)筛选对胚胎发育起关键作用的基因成为可能.为了解牛卵母细胞成熟过程及体外受精胚胎不同发育阶段相关基因mRNA表达规律,本研究以牛生发泡(GV)期卵母细胞、体外受精获得的8细胞期胚胎和囊胚期胚胎为检测对象,利用mRNA差异显示技术筛选这三个时期mRNA表达差异基因,并用实时定量PCR分析差异基因在这三个时期以及体外成熟卵母细胞中的mRNA丰度.结果成功筛选得到5个差异片段,经测序和GenBank数据库比对分析,检索到与这5个片段有高同源性的已知基因,分别为无机焦磷酸1基因(PPA1)、ErbB2互作蛋白基因(ERBB2IP)、350 kD中心体相互作用蛋白基因(CEP350)、核糖体蛋白L27a基因(RPL27A)和Ⅱ类主要组织相容复合物下调因子基因(IK),实时定量PCR检测和SPSS统计分析结果表明,PPA1、ERBB2IP和CEP350mRNA表达量随胚胎发育进程呈不同程度的降低趋势,RPL2 7A mRNA表达量在囊胚期由降低转为升高,IK的转录物含量在囊胚期前呈波动变化,到囊胚期显著降低.本研究结果为进一步了解卵母细胞成熟对后续胚胎发育的影响以及合子基因组激活机制提供了实验依据.
란모세포성숙화모원형-합자형과도과정중,존재대량기인적표체차이,사득응용mRNA차이현시(DDRT-PCR)사선대배태발육기관건작용적기인성위가능.위료해우란모세포성숙과정급체외수정배태불동발육계단상관기인mRNA표체규률,본연구이우생발포(GV)기란모세포、체외수정획득적8세포기배태화낭배기배태위검측대상,이용mRNA차이현시기술사선저삼개시기mRNA표체차이기인,병용실시정량PCR분석차이기인재저삼개시기이급체외성숙란모세포중적mRNA봉도.결과성공사선득도5개차이편단,경측서화GenBank수거고비대분석,검색도여저5개편단유고동원성적이지기인,분별위무궤초린산1기인(PPA1)、ErbB2호작단백기인(ERBB2IP)、350 kD중심체상호작용단백기인(CEP350)、핵당체단백L27a기인(RPL27A)화Ⅱ류주요조직상용복합물하조인자기인(IK),실시정량PCR검측화SPSS통계분석결과표명,PPA1、ERBB2IP화CEP350mRNA표체량수배태발육진정정불동정도적강저추세,RPL2 7A mRNA표체량재낭배기유강저전위승고,IK적전록물함량재낭배기전정파동변화,도낭배기현저강저.본연구결과위진일보료해란모세포성숙대후속배태발육적영향이급합자기인조격활궤제제공료실험의거.