中华微生物学和免疫学杂志
中華微生物學和免疫學雜誌
중화미생물학화면역학잡지
CHINESE JOURNAL OF MICROBIOLOGY AND IMMUNOLOGY
2006年
7期
647-653
,共7页
周永安%余新炳%陈海峰%郑焕钦%殷国荣%吴忠道%陈观今
週永安%餘新炳%陳海峰%鄭煥欽%慇國榮%吳忠道%陳觀今
주영안%여신병%진해봉%정환흠%은국영%오충도%진관금
弓形虫%SAG1%SAG3%脂质体%DNA免疫
弓形蟲%SAG1%SAG3%脂質體%DNA免疫
궁형충%SAG1%SAG3%지질체%DNA면역
目的评价弓形虫SAG1与SAG3基因真核表达质粒DNA免疫小鼠的免疫应答效果.方法以PCR方法扩增出SAG1与SAG3目的基因片段,并插入载体pEGFP-N3以构建重组质粒pE-SAG1/SAG3,瞬时转染细胞Cos-7.质粒pESAG1/SAG3以10μg剂量,脂质体介导肌肉注射BALB/c小鼠,免疫3次,最后一次免疫后4周,观察体液和细胞免疫.RT-PCR方法检测注射部位目的基因的转录;斑点杂交方法检测目的基因是否与小鼠染色体基因组整合.结果质粒pESAG1/SAG3转染细胞后观察到绿色荧光;Western blot显示pESAG1/SAG3表达识别条带在相对分子质量(Mr)66.2×103附近.小鼠免疫后,血清产生抗弓形虫速殖子抗体,诱导IFN-γ及IL-2水平高于对照组.RT-PCR显示首次免疫15 d后,目的基因在肌肉组织中仍有转录,斑点杂交显示目的基因未与小鼠的基因组发生整合,混合质粒注射的小鼠抗弓形虫感染的存活时间延长.结论脂质体介导弓形虫SAG1与SAG3复合编码基因质粒接种小鼠能明显诱导体液和细胞免疫应答.
目的評價弓形蟲SAG1與SAG3基因真覈錶達質粒DNA免疫小鼠的免疫應答效果.方法以PCR方法擴增齣SAG1與SAG3目的基因片段,併插入載體pEGFP-N3以構建重組質粒pE-SAG1/SAG3,瞬時轉染細胞Cos-7.質粒pESAG1/SAG3以10μg劑量,脂質體介導肌肉註射BALB/c小鼠,免疫3次,最後一次免疫後4週,觀察體液和細胞免疫.RT-PCR方法檢測註射部位目的基因的轉錄;斑點雜交方法檢測目的基因是否與小鼠染色體基因組整閤.結果質粒pESAG1/SAG3轉染細胞後觀察到綠色熒光;Western blot顯示pESAG1/SAG3錶達識彆條帶在相對分子質量(Mr)66.2×103附近.小鼠免疫後,血清產生抗弓形蟲速殖子抗體,誘導IFN-γ及IL-2水平高于對照組.RT-PCR顯示首次免疫15 d後,目的基因在肌肉組織中仍有轉錄,斑點雜交顯示目的基因未與小鼠的基因組髮生整閤,混閤質粒註射的小鼠抗弓形蟲感染的存活時間延長.結論脂質體介導弓形蟲SAG1與SAG3複閤編碼基因質粒接種小鼠能明顯誘導體液和細胞免疫應答.
목적평개궁형충SAG1여SAG3기인진핵표체질립DNA면역소서적면역응답효과.방법이PCR방법확증출SAG1여SAG3목적기인편단,병삽입재체pEGFP-N3이구건중조질립pE-SAG1/SAG3,순시전염세포Cos-7.질립pESAG1/SAG3이10μg제량,지질체개도기육주사BALB/c소서,면역3차,최후일차면역후4주,관찰체액화세포면역.RT-PCR방법검측주사부위목적기인적전록;반점잡교방법검측목적기인시부여소서염색체기인조정합.결과질립pESAG1/SAG3전염세포후관찰도록색형광;Western blot현시pESAG1/SAG3표체식별조대재상대분자질량(Mr)66.2×103부근.소서면역후,혈청산생항궁형충속식자항체,유도IFN-γ급IL-2수평고우대조조.RT-PCR현시수차면역15 d후,목적기인재기육조직중잉유전록,반점잡교현시목적기인미여소서적기인조발생정합,혼합질립주사적소서항궁형충감염적존활시간연장.결론지질체개도궁형충SAG1여SAG3복합편마기인질립접충소서능명현유도체액화세포면역응답.
