中国水产科学
中國水產科學
중국수산과학
Journal of Fishery Sciences of China
2003年
1期
10-13
,共4页
江世贵%何建国%张欣强%邓敏%余建秀
江世貴%何建國%張訢彊%鄧敏%餘建秀
강세귀%하건국%장흔강%산민%여건수
基因克隆和表达%白斑综合症病毒%融合蛋白%Western blot
基因剋隆和錶達%白斑綜閤癥病毒%融閤蛋白%Western blot
기인극륭화표체%백반종합증병독%융합단백%Western blot
根据对虾白斑综合症病毒(white spot syndrome virus, WSSV)1个可能编码蛋白的开放读码框(open reading frame, ORF)的序列(WSSV A 基因),结合pQE30载体的多克隆位点,设计1对引物进行 PCR,扩增出大小为 0.28 kb 的 A 基因片段.把目的片段克隆到 pGEM-T Easy 载体上,构建出重组质粒 pGT-A,再用引物两端酶酶切出目的片段,并按正确的读码框顺序插入到 pQE30表达载体上的乳糖操纵子中,构建出带有目的片段的重组质粒 pQE30-A,然后将重组质粒转化大肠杆菌 M15细胞,经 IPTG 诱导,SDS-PAGE 和 Western blot 显示有与 A 基因预期大小 11 kD 相吻合的融合蛋白带.结果表明,来源于 WSSV的这一ORF是1个可表达的基因.
根據對蝦白斑綜閤癥病毒(white spot syndrome virus, WSSV)1箇可能編碼蛋白的開放讀碼框(open reading frame, ORF)的序列(WSSV A 基因),結閤pQE30載體的多剋隆位點,設計1對引物進行 PCR,擴增齣大小為 0.28 kb 的 A 基因片段.把目的片段剋隆到 pGEM-T Easy 載體上,構建齣重組質粒 pGT-A,再用引物兩耑酶酶切齣目的片段,併按正確的讀碼框順序插入到 pQE30錶達載體上的乳糖操縱子中,構建齣帶有目的片段的重組質粒 pQE30-A,然後將重組質粒轉化大腸桿菌 M15細胞,經 IPTG 誘導,SDS-PAGE 和 Western blot 顯示有與 A 基因預期大小 11 kD 相吻閤的融閤蛋白帶.結果錶明,來源于 WSSV的這一ORF是1箇可錶達的基因.
근거대하백반종합증병독(white spot syndrome virus, WSSV)1개가능편마단백적개방독마광(open reading frame, ORF)적서렬(WSSV A 기인),결합pQE30재체적다극륭위점,설계1대인물진행 PCR,확증출대소위 0.28 kb 적 A 기인편단.파목적편단극륭도 pGEM-T Easy 재체상,구건출중조질립 pGT-A,재용인물량단매매절출목적편단,병안정학적독마광순서삽입도 pQE30표체재체상적유당조종자중,구건출대유목적편단적중조질립 pQE30-A,연후장중조질립전화대장간균 M15세포,경 IPTG 유도,SDS-PAGE 화 Western blot 현시유여 A 기인예기대소 11 kD 상문합적융합단백대.결과표명,래원우 WSSV적저일ORF시1개가표체적기인.
