CAJ | 학술논문

[目的]克隆乳腺癌相关分子人乳腺珠蛋白(human mammaglobin,hMAM)基因并诱导其表达,为后期研制乳腺癌早期诊断试剂盒奠定基础,从而为早期发现乳腺癌提供科学的监测方法.[方法]从乳腺癌组织提取总RNA,通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增hMAM基因编码序列,将扩增产物克隆至PGEM-T载体中,DNA测序,用限制性内切酶切下目的基因,与相同酶切的表达载体pQE40连接、筛选、鉴定,构建pQE40-hMAM融合表达质粒,以硫代半乳糖苷(IPTG)诱导在大肠杆菌M15中表达,聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析表达结果.[结果]琼脂糖凝胶电泳显示聚合酶链反应(PCR)扩增产物的分子量大小与预期相符.对重组质粒分析表明,插入片段的序列与文献报道hMAM基因编码序列一致.在IPTG的诱导下,M15重组菌高效表达出一个相对分子质量约为34 kD的产物.[结论]重组表达质粒pQE40-hMAM表达成功.
[목적]극륭유선암상관분자인유선주단백(human mammaglobin,hMAM)기인병유도기표체,위후기연제유선암조기진단시제합전정기출,종이위조기발현유선암제공과학적감측방법.[방법]종유선암조직제취총RNA,통과역전록취합매련반응(RT-PCR)확증hMAM기인편마서렬,장확증산물극륭지PGEM-T재체중,DNA측서,용한제성내절매절하목적기인,여상동매절적표체재체pQE40련접、사선、감정,구건pQE40-hMAM융합표체질립,이류대반유당감(IPTG)유도재대장간균M15중표체,취병희선알응효전영(SDS-PAGE)분석표체결과.[결과]경지당응효전영현시취합매련반응(PCR)확증산물적분자량대소여예기상부.대중조질립분석표명,삽입편단적서렬여문헌보도hMAM기인편마서렬일치.재IPTG적유도하,M15중조균고효표체출일개상대분자질량약위34 kD적산물.[결론]중조표체질립pQE40-hMAM표체성공.