CAJ | 학술논문

采用RT-PCR方法分别扩增口蹄疫病毒O/China99毒株的P1-2A和3C基因,将P1-2A基因连接到pUC119载体,3C基因连接到pMDI8-T载体,分别得到重组载体pUCll9-P1-2A和pMDI8-T-3C;将重组载体pUCll9-P1-2A用HindⅢ、BamH I酶切,重组载体pMDI8-T-3C用BamH I、Nhe I酶切;利用酶切所得到的基因片段P1-2A、3C有共同的BamH I酶切位点,实现基因P1-2A、3C的连接,构建重组载体pMDI8-T-P1-2A-3C.,将基因P1-2A-3C与启动EGFP表达的双向串连痘苗病毒启动子P7.5相连,构建载体p-EGFP-N1-P7.5-P1-2A3C,并进行PCR扩增、酶切鉴定及序列测定.结果表明:试验成功构建了一侧启动表达P1-2A-3C基因,一侧启动表达标记基因EGFP的表达盒p-EGFP-N1-P7.5-P1-2A-3C.
채용RT-PCR방법분별확증구제역병독O/China99독주적P1-2A화3C기인,장P1-2A기인련접도pUC119재체,3C기인련접도pMDI8-T재체,분별득도중조재체pUCll9-P1-2A화pMDI8-T-3C;장중조재체pUCll9-P1-2A용HindⅢ、BamH I매절,중조재체pMDI8-T-3C용BamH I、Nhe I매절;이용매절소득도적기인편단P1-2A、3C유공동적BamH I매절위점,실현기인P1-2A、3C적련접,구건중조재체pMDI8-T-P1-2A-3C.,장기인P1-2A-3C여계동EGFP표체적쌍향천련두묘병독계동자P7.5상련,구건재체p-EGFP-N1-P7.5-P1-2A3C,병진행PCR확증、매절감정급서렬측정.결과표명:시험성공구건료일측계동표체P1-2A-3C기인,일측계동표체표기기인EGFP적표체합p-EGFP-N1-P7.5-P1-2A-3C.