济宁医学院学报
濟寧醫學院學報
제저의학원학보
JOURNAL OF JINING MEDICAL COLLEGE
2011年
6期
381-384,402
,共5页
花背蟾蜍%Pax6 variant%原核表达%多克隆抗体
花揹蟾蜍%Pax6 variant%原覈錶達%多剋隆抗體
화배섬서%Pax6 variant%원핵표체%다극륭항체
目的 构建花背蟾蜍(Bufo raddei Strauch)转录因子Pax6 variant的原核表达载体,纯化融合蛋白His-Pax6 variant并以其为抗原免疫家兔,制备花背蟾蜍转录因子Pax6 variant多克隆抗体.方法 RT-PCR扩增得到花背蟾蜍胚胎组织的Pax6 variant基因,并将此片段与原核表达载体pET-28a-c连接,构建重组表达质粒pET-Pax6 variant并转化大肠杆菌Rosetta(DE3)菌株,诱导融合蛋白His-Pax6 variant表达;所获得的可溶性蛋白经亲和层析纯化、SDS-PAGE电泳鉴定后,免疫家兔制备抗血清,分别采用ELISA、Western blot检测抗体效价和特异性.结果 从花背蟾蜍胚胎组织中克隆了Pax6 variant基因,并成功构建了其原核表达质粒；SDS-PAGE结果证实获得Mr为43 300的His-Pax6融合蛋白且为可溶性蛋白;经过His亲和层析有效纯化；以该融合蛋白免疫家兔制备得到的抗血清经Western blot检测证实能与目的蛋白发生特异性结合,ELISA检测为阳性.结论 获得了花背蟾蜍转录因子Pax6 variant蛋白及特异性多克隆抗体,对进一步研究花背蟾蜍Pax6 variant在发育过程中功能奠定基础.
目的 構建花揹蟾蜍(Bufo raddei Strauch)轉錄因子Pax6 variant的原覈錶達載體,純化融閤蛋白His-Pax6 variant併以其為抗原免疫傢兔,製備花揹蟾蜍轉錄因子Pax6 variant多剋隆抗體.方法 RT-PCR擴增得到花揹蟾蜍胚胎組織的Pax6 variant基因,併將此片段與原覈錶達載體pET-28a-c連接,構建重組錶達質粒pET-Pax6 variant併轉化大腸桿菌Rosetta(DE3)菌株,誘導融閤蛋白His-Pax6 variant錶達;所穫得的可溶性蛋白經親和層析純化、SDS-PAGE電泳鑒定後,免疫傢兔製備抗血清,分彆採用ELISA、Western blot檢測抗體效價和特異性.結果 從花揹蟾蜍胚胎組織中剋隆瞭Pax6 variant基因,併成功構建瞭其原覈錶達質粒；SDS-PAGE結果證實穫得Mr為43 300的His-Pax6融閤蛋白且為可溶性蛋白;經過His親和層析有效純化；以該融閤蛋白免疫傢兔製備得到的抗血清經Western blot檢測證實能與目的蛋白髮生特異性結閤,ELISA檢測為暘性.結論 穫得瞭花揹蟾蜍轉錄因子Pax6 variant蛋白及特異性多剋隆抗體,對進一步研究花揹蟾蜍Pax6 variant在髮育過程中功能奠定基礎.
목적 구건화배섬서(Bufo raddei Strauch)전록인자Pax6 variant적원핵표체재체,순화융합단백His-Pax6 variant병이기위항원면역가토,제비화배섬서전록인자Pax6 variant다극륭항체.방법 RT-PCR확증득도화배섬서배태조직적Pax6 variant기인,병장차편단여원핵표체재체pET-28a-c련접,구건중조표체질립pET-Pax6 variant병전화대장간균Rosetta(DE3)균주,유도융합단백His-Pax6 variant표체;소획득적가용성단백경친화층석순화、SDS-PAGE전영감정후,면역가토제비항혈청,분별채용ELISA、Western blot검측항체효개화특이성.결과 종화배섬서배태조직중극륭료Pax6 variant기인,병성공구건료기원핵표체질립；SDS-PAGE결과증실획득Mr위43 300적His-Pax6융합단백차위가용성단백;경과His친화층석유효순화；이해융합단백면역가토제비득도적항혈청경Western blot검측증실능여목적단백발생특이성결합,ELISA검측위양성.결론 획득료화배섬서전록인자Pax6 variant단백급특이성다극륭항체,대진일보연구화배섬서Pax6 variant재발육과정중공능전정기출.
