中华结核和呼吸杂志
中華結覈和呼吸雜誌
중화결핵화호흡잡지
Chinese Journal of Tuberculosis and Respiratory Diseases
2005年
5期
297-300
,共4页
赵锦荣%白玉杰%王琰%张庆华%罗明%闫小君
趙錦榮%白玉傑%王琰%張慶華%囉明%閆小君
조금영%백옥걸%왕염%장경화%라명%염소군
分枝杆菌,结核%利福平%抗药性,微生物%DNA突变分析
分枝桿菌,結覈%利福平%抗藥性,微生物%DNA突變分析
분지간균,결핵%리복평%항약성,미생물%DNA돌변분석
目的基于焦磷酸测序(pyrosequencing)技术,建立耐利福平结核分枝杆菌快速检测方法,并探讨其临床应用价值.方法设计一对聚合酶链反应(PCR)引物,其中一引物经生物素化修饰,PCR扩增含耐药决定区一297 bp 长的rpoB基因片段,借用链亲和素包被磁珠纯化单链PCR产物.设计2个正向测序引物,运用pyrosequencing技术对耐药决定区进行序列测定.通过对一系列10倍稀释的结核分枝杆菌H37Rv标准株DNA进行分析,评价所建立方法的检测敏感性.通过对已知耐药表型的结核分枝杆菌临床分离株进行分析,评价所建立方法的检测特异性.结果 PCR扩增后,可在2 h内得到耐药决定区序列.所建立方法的检测灵敏度为 50 fg DNA/反应.在所分析的利福平敏感株中均未检测到耐药决定区突变,而在耐利福平菌株中均检测到耐药决定区突变.结论所建立的方法具有自动化程度高和结果准确等特点,适用于对耐利福平结核分枝杆菌进行快速高通量检测.
目的基于焦燐痠測序(pyrosequencing)技術,建立耐利福平結覈分枝桿菌快速檢測方法,併探討其臨床應用價值.方法設計一對聚閤酶鏈反應(PCR)引物,其中一引物經生物素化脩飾,PCR擴增含耐藥決定區一297 bp 長的rpoB基因片段,藉用鏈親和素包被磁珠純化單鏈PCR產物.設計2箇正嚮測序引物,運用pyrosequencing技術對耐藥決定區進行序列測定.通過對一繫列10倍稀釋的結覈分枝桿菌H37Rv標準株DNA進行分析,評價所建立方法的檢測敏感性.通過對已知耐藥錶型的結覈分枝桿菌臨床分離株進行分析,評價所建立方法的檢測特異性.結果 PCR擴增後,可在2 h內得到耐藥決定區序列.所建立方法的檢測靈敏度為 50 fg DNA/反應.在所分析的利福平敏感株中均未檢測到耐藥決定區突變,而在耐利福平菌株中均檢測到耐藥決定區突變.結論所建立的方法具有自動化程度高和結果準確等特點,適用于對耐利福平結覈分枝桿菌進行快速高通量檢測.
목적기우초린산측서(pyrosequencing)기술,건립내리복평결핵분지간균쾌속검측방법,병탐토기림상응용개치.방법설계일대취합매련반응(PCR)인물,기중일인물경생물소화수식,PCR확증함내약결정구일297 bp 장적rpoB기인편단,차용련친화소포피자주순화단련PCR산물.설계2개정향측서인물,운용pyrosequencing기술대내약결정구진행서렬측정.통과대일계렬10배희석적결핵분지간균H37Rv표준주DNA진행분석,평개소건립방법적검측민감성.통과대이지내약표형적결핵분지간균림상분리주진행분석,평개소건립방법적검측특이성.결과 PCR확증후,가재2 h내득도내약결정구서렬.소건립방법적검측령민도위 50 fg DNA/반응.재소분석적리복평민감주중균미검측도내약결정구돌변,이재내리복평균주중균검측도내약결정구돌변.결론소건립적방법구유자동화정도고화결과준학등특점,괄용우대내리복평결핵분지간균진행쾌속고통량검측.
