生物工程学报
生物工程學報
생물공정학보
CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY
2003年
6期
661-667
,共7页
陆光涛%唐纪良%何勇强%陈保善%唐东阶
陸光濤%唐紀良%何勇彊%陳保善%唐東階
륙광도%당기량%하용강%진보선%당동계
野油菜黄单胞菌野油菜致病变种%胞外多糖%waxE基因
野油菜黃單胞菌野油菜緻病變種%胞外多糖%waxE基因
야유채황단포균야유채치병변충%포외다당%waxE기인
利用转座子Tn5gusA5对野油菜黄单胞菌野油菜致病变种(Xanthomonas campestris pv. campestris,简称Xcc)野生型菌株8004进行诱变,分离到一批胞外多糖(EPS)合成减少的突变体.采用TAIL-PCR(thermal asymmetric interlaced PCR)分析突变体的Tn5gusA5插入位点,发现其中一株编号为151D09的突变体的插入位点位于Xcc 8004菌株的基因组编号为XC3695的ORF内,该ORF功能尚未见报道.序列分析表明,该ORF演绎的编码产物与Serratia marcescens的kdtX基因和Klebsiella pneumoniae的waaE基因演绎的编码产物分别具有52%和50%的相似性,并具有第2家族糖基转移酶的功能域, 因此暂将该ORF命名为waxE基因.用同源双交换方法构建了waxE基因的缺失突变体,并采用PCR和Southern杂交的方法对突变体进行了验证.waxE基因缺失突变体在营养丰富培养基的生长繁殖不受影响,但其EPS产量与野生型菌株8004相比,降低35%左右,并且一段PCR合成的包含waxE基因的DNA片段能反式互补waxE基因缺失突变体,恢复缺失突变体的EPS产量,表明Xcc waxE基因与EPS的生物合成有关.
利用轉座子Tn5gusA5對野油菜黃單胞菌野油菜緻病變種(Xanthomonas campestris pv. campestris,簡稱Xcc)野生型菌株8004進行誘變,分離到一批胞外多糖(EPS)閤成減少的突變體.採用TAIL-PCR(thermal asymmetric interlaced PCR)分析突變體的Tn5gusA5插入位點,髮現其中一株編號為151D09的突變體的插入位點位于Xcc 8004菌株的基因組編號為XC3695的ORF內,該ORF功能尚未見報道.序列分析錶明,該ORF縯繹的編碼產物與Serratia marcescens的kdtX基因和Klebsiella pneumoniae的waaE基因縯繹的編碼產物分彆具有52%和50%的相似性,併具有第2傢族糖基轉移酶的功能域, 因此暫將該ORF命名為waxE基因.用同源雙交換方法構建瞭waxE基因的缺失突變體,併採用PCR和Southern雜交的方法對突變體進行瞭驗證.waxE基因缺失突變體在營養豐富培養基的生長繁殖不受影響,但其EPS產量與野生型菌株8004相比,降低35%左右,併且一段PCR閤成的包含waxE基因的DNA片段能反式互補waxE基因缺失突變體,恢複缺失突變體的EPS產量,錶明Xcc waxE基因與EPS的生物閤成有關.
이용전좌자Tn5gusA5대야유채황단포균야유채치병변충(Xanthomonas campestris pv. campestris,간칭Xcc)야생형균주8004진행유변,분리도일비포외다당(EPS)합성감소적돌변체.채용TAIL-PCR(thermal asymmetric interlaced PCR)분석돌변체적Tn5gusA5삽입위점,발현기중일주편호위151D09적돌변체적삽입위점위우Xcc 8004균주적기인조편호위XC3695적ORF내,해ORF공능상미견보도.서렬분석표명,해ORF연역적편마산물여Serratia marcescens적kdtX기인화Klebsiella pneumoniae적waaE기인연역적편마산물분별구유52%화50%적상사성,병구유제2가족당기전이매적공능역, 인차잠장해ORF명명위waxE기인.용동원쌍교환방법구건료waxE기인적결실돌변체,병채용PCR화Southern잡교적방법대돌변체진행료험증.waxE기인결실돌변체재영양봉부배양기적생장번식불수영향,단기EPS산량여야생형균주8004상비,강저35%좌우,병차일단PCR합성적포함waxE기인적DNA편단능반식호보waxE기인결실돌변체,회복결실돌변체적EPS산량,표명Xcc waxE기인여EPS적생물합성유관.
