中国卫生检验杂志
中國衛生檢驗雜誌
중국위생검험잡지
CHINESE JOURNAL OF HEALTH LABORATORY TECHNOLOGY
2007年
4期
604-605,615
,共3页
张传海%刘秋英%金琳%刘格%郭朝万%张美英%王一飞
張傳海%劉鞦英%金琳%劉格%郭朝萬%張美英%王一飛
장전해%류추영%금림%류격%곽조만%장미영%왕일비
nm23-H1基因%实时荧光定量PCR%重组质粒%标准品
nm23-H1基因%實時熒光定量PCR%重組質粒%標準品
nm23-H1기인%실시형광정량PCR%중조질립%표준품
目的:制备用于nm23-H1基因mRNA实时荧光定量PCR检测的质粒标准品.方法:通过PCR扩增出目的片断,纯化后T-A连接至pMD18-T载体,转化宿主菌E.coli DHSα,获得阳性克隆;通过PCR扩增、双酶切鉴定和测序分析,确认重组质粒完整正确;大量抽提重组质粒,测定其拷贝浓度,10倍稀释成梯度标准品,并进行荧光定量PCR检测分析.结果:nm23-H1基因目的片段成功重组至pMD18-T载体上,获得的重组质粒保持了目的片段的特异性和序列完整性.梯度浓度标准质粒的荧光定量PCR结果显示,循环阈值(Ct)与起始模板量的对数值之间有着良好的线性关系.结论:成功构建了nm23-H1基因实时荧光定量PCR质粒标准品.
目的:製備用于nm23-H1基因mRNA實時熒光定量PCR檢測的質粒標準品.方法:通過PCR擴增齣目的片斷,純化後T-A連接至pMD18-T載體,轉化宿主菌E.coli DHSα,穫得暘性剋隆;通過PCR擴增、雙酶切鑒定和測序分析,確認重組質粒完整正確;大量抽提重組質粒,測定其拷貝濃度,10倍稀釋成梯度標準品,併進行熒光定量PCR檢測分析.結果:nm23-H1基因目的片段成功重組至pMD18-T載體上,穫得的重組質粒保持瞭目的片段的特異性和序列完整性.梯度濃度標準質粒的熒光定量PCR結果顯示,循環閾值(Ct)與起始模闆量的對數值之間有著良好的線性關繫.結論:成功構建瞭nm23-H1基因實時熒光定量PCR質粒標準品.
목적:제비용우nm23-H1기인mRNA실시형광정량PCR검측적질립표준품.방법:통과PCR확증출목적편단,순화후T-A련접지pMD18-T재체,전화숙주균E.coli DHSα,획득양성극륭;통과PCR확증、쌍매절감정화측서분석,학인중조질립완정정학;대량추제중조질립,측정기고패농도,10배희석성제도표준품,병진행형광정량PCR검측분석.결과:nm23-H1기인목적편단성공중조지pMD18-T재체상,획득적중조질립보지료목적편단적특이성화서렬완정성.제도농도표준질립적형광정량PCR결과현시,순배역치(Ct)여기시모판량적대수치지간유착량호적선성관계.결론:성공구건료nm23-H1기인실시형광정량PCR질립표준품.
