广东医学
廣東醫學
엄동의학
GUNAGDONG MEDICAL JOURNAL
2007年
8期
1233-1235
,共3页
宁云山%李妍%罗军%董文其%李明
寧雲山%李妍%囉軍%董文其%李明
저운산%리연%라군%동문기%리명
幽门螺杆菌%Lpp20%克隆%基因表达%抗原性
幽門螺桿菌%Lpp20%剋隆%基因錶達%抗原性
유문라간균%Lpp20%극륭%기인표체%항원성
目的 获得原核重组表达的人幽门螺杆菌(helicobacter pylori,Hp)脂蛋白(lipoprotein20,Lpp20),并将其用于Hp感染的血清学检测.方法 应用PCR技术从Hp标准株NCTC11639染色体DNA中扩增出Lpp20的编码基因片段,先进行T-A克隆和测序,并与Genbank公布的其它Hp菌株基因序列比较,再将目的 基因克隆至表达载体pGEX-4T-1上,在E.coli TOP10中进行表达并进行GST-亲和层析纯化,用Western blot方法检测纯化产物Lpp20与Hp感染患者血清的反应,以Lpp20为包被抗原建立ELISA法对143份血样进行检测,并以试剂盒为参照.结果 扩增的Lpp20基因全长528 bp(GenBank登录号为DQ106902),与GebBank上公布的其它Hp菌株的序列相比较,核苷酸序列的同源性为96%～97%,推定氨基酸序列的同源性为98%～100%,表达的Lpp20融合蛋白分子量约为48 kDa,纯化产物可被Hp感染患者血清识别,以重组的Lpp20抗原建立的ELISA法检测Hp感染与试剂盒没有显著性差异.结论 重组Lpp20蛋白具有较好的抗原性,可用Hp感染的临床血清学检测及流行病学研究.
目的 穫得原覈重組錶達的人幽門螺桿菌(helicobacter pylori,Hp)脂蛋白(lipoprotein20,Lpp20),併將其用于Hp感染的血清學檢測.方法 應用PCR技術從Hp標準株NCTC11639染色體DNA中擴增齣Lpp20的編碼基因片段,先進行T-A剋隆和測序,併與Genbank公佈的其它Hp菌株基因序列比較,再將目的 基因剋隆至錶達載體pGEX-4T-1上,在E.coli TOP10中進行錶達併進行GST-親和層析純化,用Western blot方法檢測純化產物Lpp20與Hp感染患者血清的反應,以Lpp20為包被抗原建立ELISA法對143份血樣進行檢測,併以試劑盒為參照.結果 擴增的Lpp20基因全長528 bp(GenBank登錄號為DQ106902),與GebBank上公佈的其它Hp菌株的序列相比較,覈苷痠序列的同源性為96%～97%,推定氨基痠序列的同源性為98%～100%,錶達的Lpp20融閤蛋白分子量約為48 kDa,純化產物可被Hp感染患者血清識彆,以重組的Lpp20抗原建立的ELISA法檢測Hp感染與試劑盒沒有顯著性差異.結論 重組Lpp20蛋白具有較好的抗原性,可用Hp感染的臨床血清學檢測及流行病學研究.
목적 획득원핵중조표체적인유문라간균(helicobacter pylori,Hp)지단백(lipoprotein20,Lpp20),병장기용우Hp감염적혈청학검측.방법 응용PCR기술종Hp표준주NCTC11639염색체DNA중확증출Lpp20적편마기인편단,선진행T-A극륭화측서,병여Genbank공포적기타Hp균주기인서렬비교,재장목적 기인극륭지표체재체pGEX-4T-1상,재E.coli TOP10중진행표체병진행GST-친화층석순화,용Western blot방법검측순화산물Lpp20여Hp감염환자혈청적반응,이Lpp20위포피항원건립ELISA법대143빈혈양진행검측,병이시제합위삼조.결과 확증적Lpp20기인전장528 bp(GenBank등록호위DQ106902),여GebBank상공포적기타Hp균주적서렬상비교,핵감산서렬적동원성위96%～97%,추정안기산서렬적동원성위98%～100%,표체적Lpp20융합단백분자량약위48 kDa,순화산물가피Hp감염환자혈청식별,이중조적Lpp20항원건립적ELISA법검측Hp감염여시제합몰유현저성차이.결론 중조Lpp20단백구유교호적항원성,가용Hp감염적림상혈청학검측급류행병학연구.
