西安交通大学学报（医学版）
西安交通大學學報（醫學版）
서안교통대학학보（의학판）
JOURNAL OF XI'AN JIAOTONG UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCES)
2009年
4期
395-398
,共4页
廖兴江%戴佳琳%黄江%胡旭初%余新炳%申萍香%周灵贵%郎书源
廖興江%戴佳琳%黃江%鬍旭初%餘新炳%申萍香%週靈貴%郎書源
료흥강%대가림%황강%호욱초%여신병%신평향%주령귀%랑서원
亚洲牛带绦虫%泛素缀合酶E2%基因克隆%原核表达%免疫反应性
亞洲牛帶縚蟲%汎素綴閤酶E2%基因剋隆%原覈錶達%免疫反應性
아주우대조충%범소철합매E2%기인극륭%원핵표체%면역반응성
目的 克隆表达亚洲牛带绦虫泛素缀合酶E2(UBC E2)全长编码序列,获得纯化的重组蛋白,为进一步功能研究做充分准备.方法 以亚洲牛带绦虫成虫cDNA文库中含有UBC E2基因的质粒作为模板,扩增该基因,将其克隆到原核表达载体pET-28a(+)中,测序鉴定重组质粒,在大肠杆菌BL-21/DE3中用IPTG诱导,表达产物通过十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定,重组后的蛋白用His-镍蛋白纯化柱纯化,并使用Western blotting分析其免疫反应性.结果 PCR、双酶切及DNA测序结果均表明重组质粒pET-28a(+)-UBC E2构建成功,该基因在大肠杆菌中以包涵体形式得到表达,十二烷基肌氨酸钠纯化后蛋白通过SDS-PAGE鉴定结果表明该基因在大肠杆菌BL-21/DE3得到高效表达,亲和层析得到高纯度的蛋白且该重组蛋白可被亚洲带绦虫及牛带绦虫患者血清识别,表明其有免疫反应性.结论 亚洲牛带绦虫UBC E2可在原核表达系统中表达,并具有免疫反应性,为进一步研究该基因的功能奠定基础.
目的 剋隆錶達亞洲牛帶縚蟲汎素綴閤酶E2(UBC E2)全長編碼序列,穫得純化的重組蛋白,為進一步功能研究做充分準備.方法 以亞洲牛帶縚蟲成蟲cDNA文庫中含有UBC E2基因的質粒作為模闆,擴增該基因,將其剋隆到原覈錶達載體pET-28a(+)中,測序鑒定重組質粒,在大腸桿菌BL-21/DE3中用IPTG誘導,錶達產物通過十二烷基磺痠鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)鑒定,重組後的蛋白用His-鎳蛋白純化柱純化,併使用Western blotting分析其免疫反應性.結果 PCR、雙酶切及DNA測序結果均錶明重組質粒pET-28a(+)-UBC E2構建成功,該基因在大腸桿菌中以包涵體形式得到錶達,十二烷基肌氨痠鈉純化後蛋白通過SDS-PAGE鑒定結果錶明該基因在大腸桿菌BL-21/DE3得到高效錶達,親和層析得到高純度的蛋白且該重組蛋白可被亞洲帶縚蟲及牛帶縚蟲患者血清識彆,錶明其有免疫反應性.結論 亞洲牛帶縚蟲UBC E2可在原覈錶達繫統中錶達,併具有免疫反應性,為進一步研究該基因的功能奠定基礎.
목적 극륭표체아주우대조충범소철합매E2(UBC E2)전장편마서렬,획득순화적중조단백,위진일보공능연구주충분준비.방법 이아주우대조충성충cDNA문고중함유UBC E2기인적질립작위모판,확증해기인,장기극륭도원핵표체재체pET-28a(+)중,측서감정중조질립,재대장간균BL-21/DE3중용IPTG유도,표체산물통과십이완기광산납-취병희선알응효전영(SDS-PAGE)감정,중조후적단백용His-얼단백순화주순화,병사용Western blotting분석기면역반응성.결과 PCR、쌍매절급DNA측서결과균표명중조질립pET-28a(+)-UBC E2구건성공,해기인재대장간균중이포함체형식득도표체,십이완기기안산납순화후단백통과SDS-PAGE감정결과표명해기인재대장간균BL-21/DE3득도고효표체,친화층석득도고순도적단백차해중조단백가피아주대조충급우대조충환자혈청식별,표명기유면역반응성.결론 아주우대조충UBC E2가재원핵표체계통중표체,병구유면역반응성,위진일보연구해기인적공능전정기출.
