华中科技大学学报(医学版)
華中科技大學學報(醫學版)
화중과기대학학보(의학판)
JOURNAL OF HUAZHONG UNIVERSITY OF SCIENCE AND TECHNOLOGY(HEALTH SCIENCES)
2010年
3期
299-304,310
,共7页
气道上皮%黏蛋白类%人中性粒细胞弹性蛋白酶%受体,表皮生长因子%血红素加氧酶-1
氣道上皮%黏蛋白類%人中性粒細胞彈性蛋白酶%受體,錶皮生長因子%血紅素加氧酶-1
기도상피%점단백류%인중성립세포탄성단백매%수체,표피생장인자%혈홍소가양매-1
目的 探讨血红素加氧酶-1(HO-1)对炎性刺激时人气道上皮细胞黏液分泌的影响.方法 通过人中性粒细胞弹性蛋白酶(HNE)刺激人肺腺癌细胞A549,构建炎性刺激下气道黏液高分泌模型,给予HO-1诱导剂氯化高铁血红素(Hemin)及HO-1抑制剂锌原卟啉(ZnPP Ⅸ)干预,观察黏蛋白5AC(MUC5AC)、表皮生长因子受体(EGFR)、磷酸化EGFR(p-EGFR)、HO-1及双功能氧化酶1(Duox1)的表达.将A549细胞分为对照组、HNE刺激组、Hemin干预组和ZnPP Ⅸ干预组.用四甲基偶氮唑盐法(MTT)测定Hemin及ZnPP Ⅸ对细胞活性的影响;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测各组HO-1、Duox1、EGFR 及MUC5AC mRNA的转录水平;Western blot法检测p-EGFR、EGFR、Duox1和HO-1蛋白的表达;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测细胞裂解液中MUC5AC蛋白表达水平的变化;并用细胞免疫化学激光共聚焦显微镜观察不同条件下MUC5AC蛋白表达的变化.结果 HNE刺激组MUC5AC mRNA积分吸光度值和蛋白水平分别为(0.845±0.044)和(192.68±4.71)μg/mg,EGFR mRNA和蛋白的积分吸光度值分别为(0.868±0.039)和(0.623±0.052),均较对照组[(0.462±0.053)、(104.95±6.82)μg/mg和(0.528±0.054)、(0.297±0.055)]明显升高(均P＜0.01);p-EGFR蛋白水平亦明显升高,且HO-1及Duox1的mRNA和蛋白水平也较对照组显著增高(均P＜0.01).给予Hemin预处理后,与HNE刺激组相比,HO-1 mRNA及蛋白明显增多,p-EGFR蛋白水平、Duox1、EGFR及MUC5AC的mRNA和蛋白水平均降低(均P＜0.01).给予ZnPP Ⅸ预处理后,与对照组相比,HO-1 mRNA及蛋白水平无明显增高(P＞0.05),而p-EGFR蛋白水平、Duox1、EGFR及MUC5AC的mRNA和蛋白水平均明显增高(均P＜0.01).结论 HO-1可通过下调Duox1的表达,阻断EGFR活化上游的配体依赖信号途径,减少EGFR活化,抑制MUC5AC的表达,此机制为气道黏液高分泌疾病的防治提供了新的方向.
目的 探討血紅素加氧酶-1(HO-1)對炎性刺激時人氣道上皮細胞黏液分泌的影響.方法 通過人中性粒細胞彈性蛋白酶(HNE)刺激人肺腺癌細胞A549,構建炎性刺激下氣道黏液高分泌模型,給予HO-1誘導劑氯化高鐵血紅素(Hemin)及HO-1抑製劑鋅原卟啉(ZnPP Ⅸ)榦預,觀察黏蛋白5AC(MUC5AC)、錶皮生長因子受體(EGFR)、燐痠化EGFR(p-EGFR)、HO-1及雙功能氧化酶1(Duox1)的錶達.將A549細胞分為對照組、HNE刺激組、Hemin榦預組和ZnPP Ⅸ榦預組.用四甲基偶氮唑鹽法(MTT)測定Hemin及ZnPP Ⅸ對細胞活性的影響;逆轉錄-聚閤酶鏈反應(RT-PCR)方法檢測各組HO-1、Duox1、EGFR 及MUC5AC mRNA的轉錄水平;Western blot法檢測p-EGFR、EGFR、Duox1和HO-1蛋白的錶達;酶聯免疫吸附測定法(ELISA)檢測細胞裂解液中MUC5AC蛋白錶達水平的變化;併用細胞免疫化學激光共聚焦顯微鏡觀察不同條件下MUC5AC蛋白錶達的變化.結果 HNE刺激組MUC5AC mRNA積分吸光度值和蛋白水平分彆為(0.845±0.044)和(192.68±4.71)μg/mg,EGFR mRNA和蛋白的積分吸光度值分彆為(0.868±0.039)和(0.623±0.052),均較對照組[(0.462±0.053)、(104.95±6.82)μg/mg和(0.528±0.054)、(0.297±0.055)]明顯升高(均P＜0.01);p-EGFR蛋白水平亦明顯升高,且HO-1及Duox1的mRNA和蛋白水平也較對照組顯著增高(均P＜0.01).給予Hemin預處理後,與HNE刺激組相比,HO-1 mRNA及蛋白明顯增多,p-EGFR蛋白水平、Duox1、EGFR及MUC5AC的mRNA和蛋白水平均降低(均P＜0.01).給予ZnPP Ⅸ預處理後,與對照組相比,HO-1 mRNA及蛋白水平無明顯增高(P＞0.05),而p-EGFR蛋白水平、Duox1、EGFR及MUC5AC的mRNA和蛋白水平均明顯增高(均P＜0.01).結論 HO-1可通過下調Duox1的錶達,阻斷EGFR活化上遊的配體依賴信號途徑,減少EGFR活化,抑製MUC5AC的錶達,此機製為氣道黏液高分泌疾病的防治提供瞭新的方嚮.
목적 탐토혈홍소가양매-1(HO-1)대염성자격시인기도상피세포점액분비적영향.방법 통과인중성립세포탄성단백매(HNE)자격인폐선암세포A549,구건염성자격하기도점액고분비모형,급여HO-1유도제록화고철혈홍소(Hemin)급HO-1억제제자원계람(ZnPP Ⅸ)간예,관찰점단백5AC(MUC5AC)、표피생장인자수체(EGFR)、린산화EGFR(p-EGFR)、HO-1급쌍공능양화매1(Duox1)적표체.장A549세포분위대조조、HNE자격조、Hemin간예조화ZnPP Ⅸ간예조.용사갑기우담서염법(MTT)측정Hemin급ZnPP Ⅸ대세포활성적영향;역전록-취합매련반응(RT-PCR)방법검측각조HO-1、Duox1、EGFR 급MUC5AC mRNA적전록수평;Western blot법검측p-EGFR、EGFR、Duox1화HO-1단백적표체;매련면역흡부측정법(ELISA)검측세포렬해액중MUC5AC단백표체수평적변화;병용세포면역화학격광공취초현미경관찰불동조건하MUC5AC단백표체적변화.결과 HNE자격조MUC5AC mRNA적분흡광도치화단백수평분별위(0.845±0.044)화(192.68±4.71)μg/mg,EGFR mRNA화단백적적분흡광도치분별위(0.868±0.039)화(0.623±0.052),균교대조조[(0.462±0.053)、(104.95±6.82)μg/mg화(0.528±0.054)、(0.297±0.055)]명현승고(균P＜0.01);p-EGFR단백수평역명현승고,차HO-1급Duox1적mRNA화단백수평야교대조조현저증고(균P＜0.01).급여Hemin예처리후,여HNE자격조상비,HO-1 mRNA급단백명현증다,p-EGFR단백수평、Duox1、EGFR급MUC5AC적mRNA화단백수평균강저(균P＜0.01).급여ZnPP Ⅸ예처리후,여대조조상비,HO-1 mRNA급단백수평무명현증고(P＞0.05),이p-EGFR단백수평、Duox1、EGFR급MUC5AC적mRNA화단백수평균명현증고(균P＜0.01).결론 HO-1가통과하조Duox1적표체,조단EGFR활화상유적배체의뢰신호도경,감소EGFR활화,억제MUC5AC적표체,차궤제위기도점액고분비질병적방치제공료신적방향.
