生物加工过程
生物加工過程
생물가공과정
CHINESE JOURNAL OF BIOPROCESS ENGINEERING
2010年
3期
40-43
,共4页
里氏木霉%纤维素酶%酶学性质%分离纯化
裏氏木黴%纖維素酶%酶學性質%分離純化
리씨목매%섬유소매%매학성질%분리순화
通过(NH4)2SO4分级沉淀、HiPrep 26/10 Desalting凝胶色谱脱盐、Source 15 Q阴离子交换色谱技术,里氏木霉(Rut C-30)纤维素酶主要组分得以初步分开,再经过Source 15 S阳离子交换色谱、HiPrep Sephacryl S-100 HR凝胶过滤色谱、Superdex 75 PrepGrade凝胶过滤色谱进一步分离纯化,得到2个纯化的内切葡聚糖酶组分EGⅡ、EGⅠ和一个外切葡聚糖酶组分CBHⅠ;经过SDS-PAGE电泳鉴定为电泳纯,测得相对分子质量分别为5.22×104,5.62×104和6.90×104.EGⅡ的最适反应pH是5.6,最适反应温度为65 ℃;EGⅠ的最适反应pH是4.4,最适反应温度为55 ℃;以羧甲基纤维素(CMC)为底物时,EGⅠ、EGⅡ的米氏常数(Km )分别为2.20 mg/mL、3.38 mg/mL.CBHⅠ的最适反应pH是5.8,最适反应温度为60 ℃,以对硝基苯基-β-D-纤维二糖苷(PNPC)为底物时,米氏常数(Km )为0.12 mg/mL.
通過(NH4)2SO4分級沉澱、HiPrep 26/10 Desalting凝膠色譜脫鹽、Source 15 Q陰離子交換色譜技術,裏氏木黴(Rut C-30)纖維素酶主要組分得以初步分開,再經過Source 15 S暘離子交換色譜、HiPrep Sephacryl S-100 HR凝膠過濾色譜、Superdex 75 PrepGrade凝膠過濾色譜進一步分離純化,得到2箇純化的內切葡聚糖酶組分EGⅡ、EGⅠ和一箇外切葡聚糖酶組分CBHⅠ;經過SDS-PAGE電泳鑒定為電泳純,測得相對分子質量分彆為5.22×104,5.62×104和6.90×104.EGⅡ的最適反應pH是5.6,最適反應溫度為65 ℃;EGⅠ的最適反應pH是4.4,最適反應溫度為55 ℃;以羧甲基纖維素(CMC)為底物時,EGⅠ、EGⅡ的米氏常數(Km )分彆為2.20 mg/mL、3.38 mg/mL.CBHⅠ的最適反應pH是5.8,最適反應溫度為60 ℃,以對硝基苯基-β-D-纖維二糖苷(PNPC)為底物時,米氏常數(Km )為0.12 mg/mL.
통과(NH4)2SO4분급침정、HiPrep 26/10 Desalting응효색보탈염、Source 15 Q음리자교환색보기술,리씨목매(Rut C-30)섬유소매주요조분득이초보분개,재경과Source 15 S양리자교환색보、HiPrep Sephacryl S-100 HR응효과려색보、Superdex 75 PrepGrade응효과려색보진일보분리순화,득도2개순화적내절포취당매조분EGⅡ、EGⅠ화일개외절포취당매조분CBHⅠ;경과SDS-PAGE전영감정위전영순,측득상대분자질량분별위5.22×104,5.62×104화6.90×104.EGⅡ적최괄반응pH시5.6,최괄반응온도위65 ℃;EGⅠ적최괄반응pH시4.4,최괄반응온도위55 ℃;이최갑기섬유소(CMC)위저물시,EGⅠ、EGⅡ적미씨상수(Km )분별위2.20 mg/mL、3.38 mg/mL.CBHⅠ적최괄반응pH시5.8,최괄반응온도위60 ℃,이대초기분기-β-D-섬유이당감(PNPC)위저물시,미씨상수(Km )위0.12 mg/mL.
