中国临床医学
中國臨床醫學
중국림상의학
CLINICAL MEDICAL JOURNAL OF CHINA
2011年
3期
269-274
,共6页
周晓岗%李熙雷%郭常安%周健%戴文达%董健%陈峥嵘
週曉崗%李熙雷%郭常安%週健%戴文達%董健%陳崢嶸
주효강%리희뢰%곽상안%주건%대문체%동건%진쟁영
骨髓间充质干细胞%恶性转化%小干扰RNA%端粒酶逆转录酶
骨髓間充質榦細胞%噁性轉化%小榦擾RNA%耑粒酶逆轉錄酶
골수간충질간세포%악성전화%소간우RNA%단립매역전록매
目的:探讨小干扰RNA(siRNA)抑制人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT )表达对恶性转化后骨髓间充质干细胞(transformed mesenchymal stem cells,TMCs)增殖和在动物体内成瘤能力的影响.方法:构建针对hTERT的siRNA,通过脂质体转染的方法将hTERT-siRNA转染TMCs.实验组为3个浓度组,分别为50 nmol/L、100 nmol/L、200 nmol/L,设阴性对照组和空白对照组.用噻唑蓝(MTT)法检测siRNA对TMCs生长增殖的影响.用Western blot法检测各浓度组TMCs端粒酶的含量.逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测各浓度组hTERT mRNA含量,并用TRAP-ELISA法检测各浓度组TMCs端粒酶的活性.用BALA/C裸鼠体内实验检测siRNA转染后各组TMCs在动物体内成瘤能力的变化.结果:通过Western blot,发现不同浓度的hTERT-siRNA组TMCs的端粒酶蛋白含量逐渐减少,与siRNA的浓度呈负相关.50 nmol/L、100 nmol/L、200 nmol/L组分别下降了46.2%、69.5%、91.5%;MTT法检测3个浓度组hTERT-siRNA对细胞的生长抑制率分别为2.74%、7.26%、10.23%.其中50 nmol/L组和对照组之间差异无统计学意义,而100 nmol/L组和200 nmol/L组与阴性对照组之间差异有统计学意义.RT-PCR检测结果显示50 nmol/L、100 nmol/L、200 nmol/L hTERT-siRNA转染组hTERT基因分别下降了19.2%、47.2%、86.4%.端粒重复序列扩增(TRAP)-酶联免疫吸附试验(ELISA)法检查发现,不同浓度的hTERT-siRNA对TMCs的端粒酶活性都产生抑制作用,3组分别下降了11.0%、42.9%、86.2%.100 nmol/L组和对照组TMCs在裸鼠皮下形成肿瘤的时间相似,分别为14.8 d、14.2 d;200 nmol/L组成瘤时间较晚,为17.3 d.对照组形成的皮下肿瘤体积和质量分别为2.56 cm3、1.30 g;而100 nmol/L和200 nmol/L组肿瘤体积分别为0.64 cm3、0.31 cm3,质量分别为0.78 g、0.58 g,与对照组间相比差异有统计学意义.结论:siRNA可以下调hTERT基因的表达,减少TMCs细胞内端粒酶的含量,也降低了端粒酶的活性,从而增加了TMCs的凋亡、抑制了TMCs的生长,并降低了TMCs在裸鼠体内的成瘤能力.端粒酶在MSCs恶性转化的过程中可能起了重要的作用.
目的:探討小榦擾RNA(siRNA)抑製人耑粒酶逆轉錄酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT )錶達對噁性轉化後骨髓間充質榦細胞(transformed mesenchymal stem cells,TMCs)增殖和在動物體內成瘤能力的影響.方法:構建針對hTERT的siRNA,通過脂質體轉染的方法將hTERT-siRNA轉染TMCs.實驗組為3箇濃度組,分彆為50 nmol/L、100 nmol/L、200 nmol/L,設陰性對照組和空白對照組.用噻唑藍(MTT)法檢測siRNA對TMCs生長增殖的影響.用Western blot法檢測各濃度組TMCs耑粒酶的含量.逆轉錄-聚閤酶鏈反應(RT-PCR)檢測各濃度組hTERT mRNA含量,併用TRAP-ELISA法檢測各濃度組TMCs耑粒酶的活性.用BALA/C裸鼠體內實驗檢測siRNA轉染後各組TMCs在動物體內成瘤能力的變化.結果:通過Western blot,髮現不同濃度的hTERT-siRNA組TMCs的耑粒酶蛋白含量逐漸減少,與siRNA的濃度呈負相關.50 nmol/L、100 nmol/L、200 nmol/L組分彆下降瞭46.2%、69.5%、91.5%;MTT法檢測3箇濃度組hTERT-siRNA對細胞的生長抑製率分彆為2.74%、7.26%、10.23%.其中50 nmol/L組和對照組之間差異無統計學意義,而100 nmol/L組和200 nmol/L組與陰性對照組之間差異有統計學意義.RT-PCR檢測結果顯示50 nmol/L、100 nmol/L、200 nmol/L hTERT-siRNA轉染組hTERT基因分彆下降瞭19.2%、47.2%、86.4%.耑粒重複序列擴增(TRAP)-酶聯免疫吸附試驗(ELISA)法檢查髮現,不同濃度的hTERT-siRNA對TMCs的耑粒酶活性都產生抑製作用,3組分彆下降瞭11.0%、42.9%、86.2%.100 nmol/L組和對照組TMCs在裸鼠皮下形成腫瘤的時間相似,分彆為14.8 d、14.2 d;200 nmol/L組成瘤時間較晚,為17.3 d.對照組形成的皮下腫瘤體積和質量分彆為2.56 cm3、1.30 g;而100 nmol/L和200 nmol/L組腫瘤體積分彆為0.64 cm3、0.31 cm3,質量分彆為0.78 g、0.58 g,與對照組間相比差異有統計學意義.結論:siRNA可以下調hTERT基因的錶達,減少TMCs細胞內耑粒酶的含量,也降低瞭耑粒酶的活性,從而增加瞭TMCs的凋亡、抑製瞭TMCs的生長,併降低瞭TMCs在裸鼠體內的成瘤能力.耑粒酶在MSCs噁性轉化的過程中可能起瞭重要的作用.
목적:탐토소간우RNA(siRNA)억제인단립매역전록매(human telomerase reverse transcriptase,hTERT )표체대악성전화후골수간충질간세포(transformed mesenchymal stem cells,TMCs)증식화재동물체내성류능력적영향.방법:구건침대hTERT적siRNA,통과지질체전염적방법장hTERT-siRNA전염TMCs.실험조위3개농도조,분별위50 nmol/L、100 nmol/L、200 nmol/L,설음성대조조화공백대조조.용새서람(MTT)법검측siRNA대TMCs생장증식적영향.용Western blot법검측각농도조TMCs단립매적함량.역전록-취합매련반응(RT-PCR)검측각농도조hTERT mRNA함량,병용TRAP-ELISA법검측각농도조TMCs단립매적활성.용BALA/C라서체내실험검측siRNA전염후각조TMCs재동물체내성류능력적변화.결과:통과Western blot,발현불동농도적hTERT-siRNA조TMCs적단립매단백함량축점감소,여siRNA적농도정부상관.50 nmol/L、100 nmol/L、200 nmol/L조분별하강료46.2%、69.5%、91.5%;MTT법검측3개농도조hTERT-siRNA대세포적생장억제솔분별위2.74%、7.26%、10.23%.기중50 nmol/L조화대조조지간차이무통계학의의,이100 nmol/L조화200 nmol/L조여음성대조조지간차이유통계학의의.RT-PCR검측결과현시50 nmol/L、100 nmol/L、200 nmol/L hTERT-siRNA전염조hTERT기인분별하강료19.2%、47.2%、86.4%.단립중복서렬확증(TRAP)-매련면역흡부시험(ELISA)법검사발현,불동농도적hTERT-siRNA대TMCs적단립매활성도산생억제작용,3조분별하강료11.0%、42.9%、86.2%.100 nmol/L조화대조조TMCs재라서피하형성종류적시간상사,분별위14.8 d、14.2 d;200 nmol/L조성류시간교만,위17.3 d.대조조형성적피하종류체적화질량분별위2.56 cm3、1.30 g;이100 nmol/L화200 nmol/L조종류체적분별위0.64 cm3、0.31 cm3,질량분별위0.78 g、0.58 g,여대조조간상비차이유통계학의의.결론:siRNA가이하조hTERT기인적표체,감소TMCs세포내단립매적함량,야강저료단립매적활성,종이증가료TMCs적조망、억제료TMCs적생장,병강저료TMCs재라서체내적성류능력.단립매재MSCs악성전화적과정중가능기료중요적작용.
