环境科学研究
環境科學研究
배경과학연구
RSEARCH OF ENUIRONMENTAL SCIENCES
2012年
8期
922-926
,共5页
谢润欣%张崇淼%王晓昌%孙婷婷%李宪
謝潤訢%張崇淼%王曉昌%孫婷婷%李憲
사윤흔%장숭묘%왕효창%손정정%리헌
病原性大肠埃希氏菌%eaeA%rfbE%实时荧光定量PCR%城市污水
病原性大腸埃希氏菌%eaeA%rfbE%實時熒光定量PCR%城市汙水
병원성대장애희씨균%eaeA%rfbE%실시형광정량PCR%성시오수
针对病原性大肠埃希氏菌EHEC和EPEC的毒力基因eaeA和rfbE,选用特异性引物,建立了实时荧光定量PCR检测方法.利用从污水中分离出的目的核酸片段构建重组质粒,通过测序和BLAST比对分析,确定了PCR扩增的特异性.将重组质粒作为模板,分别测定标准曲线,在eaeA基因模板量8.77～8.77×105 copy,rfbE基因模板量4.98 ～4.98×105copy的范围内,Ct(循环阈值)与模板量的对数值具有良好的线性关系[ R2为0.997( eaeA)和1.000(rfbE)].结合膜吸附洗脱浓缩方法,对于实际水样,eaeA和rfbE基因的检测限分别为1.75×102和9.96×101copy/100 mL.利用该方法对城市污水处理厂进、出水进行检测的结果显示,污水二级处理工艺对这2种毒力基因的去除效果明显.
針對病原性大腸埃希氏菌EHEC和EPEC的毒力基因eaeA和rfbE,選用特異性引物,建立瞭實時熒光定量PCR檢測方法.利用從汙水中分離齣的目的覈痠片段構建重組質粒,通過測序和BLAST比對分析,確定瞭PCR擴增的特異性.將重組質粒作為模闆,分彆測定標準麯線,在eaeA基因模闆量8.77～8.77×105 copy,rfbE基因模闆量4.98 ～4.98×105copy的範圍內,Ct(循環閾值)與模闆量的對數值具有良好的線性關繫[ R2為0.997( eaeA)和1.000(rfbE)].結閤膜吸附洗脫濃縮方法,對于實際水樣,eaeA和rfbE基因的檢測限分彆為1.75×102和9.96×101copy/100 mL.利用該方法對城市汙水處理廠進、齣水進行檢測的結果顯示,汙水二級處理工藝對這2種毒力基因的去除效果明顯.
침대병원성대장애희씨균EHEC화EPEC적독력기인eaeA화rfbE,선용특이성인물,건립료실시형광정량PCR검측방법.이용종오수중분리출적목적핵산편단구건중조질립,통과측서화BLAST비대분석,학정료PCR확증적특이성.장중조질립작위모판,분별측정표준곡선,재eaeA기인모판량8.77～8.77×105 copy,rfbE기인모판량4.98 ～4.98×105copy적범위내,Ct(순배역치)여모판량적대수치구유량호적선성관계[ R2위0.997( eaeA)화1.000(rfbE)].결합막흡부세탈농축방법,대우실제수양,eaeA화rfbE기인적검측한분별위1.75×102화9.96×101copy/100 mL.이용해방법대성시오수처리엄진、출수진행검측적결과현시,오수이급처리공예대저2충독력기인적거제효과명현.
