中国药理学与毒理学杂志
中國藥理學與毒理學雜誌
중국약이학여독이학잡지
CHINESE JOURNAL OF PHARMACOLOGY AND TOXICOLOGY
2010年
4期
255-260
,共6页
钩藤碱%肌细胞,心脏%肥大%血管紧张素Ⅱ%一氧化氮%钙调神经磷酸酶%细胞外信号调节激酶
鉤籐堿%肌細胞,心髒%肥大%血管緊張素Ⅱ%一氧化氮%鈣調神經燐痠酶%細胞外信號調節激酶
구등감%기세포,심장%비대%혈관긴장소Ⅱ%일양화담%개조신경린산매%세포외신호조절격매
目的 研究钩藤碱(Rhy)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导心肌细胞肥大的抑制作用及其可能的作用机制.方法 应用胰酶消化法制备新生大鼠原代心肌细胞,培养3 d后,随机分为正常对照组、模型组(AngⅡ 0.1 μmol·L-1)、Rhy 1,3和10 μmol·L-1组.心肌细胞加入Rhy 0,1,3和10μmol·L-1,30 min后再加入AngⅡ 0.1 μmol·L-1作用48 h.采用Leica Qwin V3图像分析系统测量心肌细胞的表面积,BCA法测定总蛋白质含量,激光共聚焦显微镜检测心肌细胞[Ca2+];,比色法测定细胞培养上清液一氧化氮(NO)含量和一氧化氮合酶(NOS)活性,实时荧光定量PCR检测心房利钠因子(ANF)、心肌细胞钙调神经磷酸酶(CaN)、细胞外信号调节激酶2(ERK2)和内皮型一氧化氮合酶(eNOS)基因的表达.结果 与正常对照组比较,AngⅡ 0.1μmol·L-1明显诱导心肌细胞肥大,心肌细胞表面积由每个细胞(167±28)μm2增加至(462±42)μm2(n=6,P<0.01),总蛋白质含量由平均每个细胞(211±10)Pg增加至(299±12)Pg(n=6,P<0.01),ANF mRNA表达亦增加,由48±4增加至227±9(n=6,P<0.01);心肌细胞[Ca2+];荧光强度由93±18增加至149±9(n=6,P<0.01),NOS活性和NO含量分别由(0.76±0.03)kU·L-1和(1.36±0.10)μmol·L-1降低至(0.45±0.09)kU·L-1和(0.73±0.04)μmol·L-1(n=6,P<0.01);另外,NOS mRNA表达降低,CaN mRNA和ERK2 mRNA表达增加(P<0.01).与模型组比较,Rhy 1,3和10μmol·L-1可抑制AngⅡ诱导的心肌细胞肥大,对表面积的抑制率分别为50%,57%和61%(P<0.05,P<0.01),对蛋白质含量的抑制率分别为7%,10%和23%(P<0.05,P<0.01),对ANF mRNA表达的抑制率为42%,56%和66%(P<0.01);明显抑制Ang Ⅱ诱导的心肌细胞[Ca2+];增加,抑制率分别为15%,20%和28%(P<0.01);另外,可增加NOS活性,促进NO释放,并显著增加eNOS mRNA表达,降低CaN mRNA和ERK2mRNA表达(P<0.05,P<0.01).结论 Rhy可抑制Ang Ⅱ诱导的心肌细胞肥大,其作用机制可能与促进NO释放、抑制CaN mRNA和ERK2 mRNA表达有关.
目的 研究鉤籐堿(Rhy)對血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)誘導心肌細胞肥大的抑製作用及其可能的作用機製.方法 應用胰酶消化法製備新生大鼠原代心肌細胞,培養3 d後,隨機分為正常對照組、模型組(AngⅡ 0.1 μmol·L-1)、Rhy 1,3和10 μmol·L-1組.心肌細胞加入Rhy 0,1,3和10μmol·L-1,30 min後再加入AngⅡ 0.1 μmol·L-1作用48 h.採用Leica Qwin V3圖像分析繫統測量心肌細胞的錶麵積,BCA法測定總蛋白質含量,激光共聚焦顯微鏡檢測心肌細胞[Ca2+];,比色法測定細胞培養上清液一氧化氮(NO)含量和一氧化氮閤酶(NOS)活性,實時熒光定量PCR檢測心房利鈉因子(ANF)、心肌細胞鈣調神經燐痠酶(CaN)、細胞外信號調節激酶2(ERK2)和內皮型一氧化氮閤酶(eNOS)基因的錶達.結果 與正常對照組比較,AngⅡ 0.1μmol·L-1明顯誘導心肌細胞肥大,心肌細胞錶麵積由每箇細胞(167±28)μm2增加至(462±42)μm2(n=6,P<0.01),總蛋白質含量由平均每箇細胞(211±10)Pg增加至(299±12)Pg(n=6,P<0.01),ANF mRNA錶達亦增加,由48±4增加至227±9(n=6,P<0.01);心肌細胞[Ca2+];熒光彊度由93±18增加至149±9(n=6,P<0.01),NOS活性和NO含量分彆由(0.76±0.03)kU·L-1和(1.36±0.10)μmol·L-1降低至(0.45±0.09)kU·L-1和(0.73±0.04)μmol·L-1(n=6,P<0.01);另外,NOS mRNA錶達降低,CaN mRNA和ERK2 mRNA錶達增加(P<0.01).與模型組比較,Rhy 1,3和10μmol·L-1可抑製AngⅡ誘導的心肌細胞肥大,對錶麵積的抑製率分彆為50%,57%和61%(P<0.05,P<0.01),對蛋白質含量的抑製率分彆為7%,10%和23%(P<0.05,P<0.01),對ANF mRNA錶達的抑製率為42%,56%和66%(P<0.01);明顯抑製Ang Ⅱ誘導的心肌細胞[Ca2+];增加,抑製率分彆為15%,20%和28%(P<0.01);另外,可增加NOS活性,促進NO釋放,併顯著增加eNOS mRNA錶達,降低CaN mRNA和ERK2mRNA錶達(P<0.05,P<0.01).結論 Rhy可抑製Ang Ⅱ誘導的心肌細胞肥大,其作用機製可能與促進NO釋放、抑製CaN mRNA和ERK2 mRNA錶達有關.
목적 연구구등감(Rhy)대혈관긴장소Ⅱ(AngⅡ)유도심기세포비대적억제작용급기가능적작용궤제.방법 응용이매소화법제비신생대서원대심기세포,배양3 d후,수궤분위정상대조조、모형조(AngⅡ 0.1 μmol·L-1)、Rhy 1,3화10 μmol·L-1조.심기세포가입Rhy 0,1,3화10μmol·L-1,30 min후재가입AngⅡ 0.1 μmol·L-1작용48 h.채용Leica Qwin V3도상분석계통측량심기세포적표면적,BCA법측정총단백질함량,격광공취초현미경검측심기세포[Ca2+];,비색법측정세포배양상청액일양화담(NO)함량화일양화담합매(NOS)활성,실시형광정량PCR검측심방리납인자(ANF)、심기세포개조신경린산매(CaN)、세포외신호조절격매2(ERK2)화내피형일양화담합매(eNOS)기인적표체.결과 여정상대조조비교,AngⅡ 0.1μmol·L-1명현유도심기세포비대,심기세포표면적유매개세포(167±28)μm2증가지(462±42)μm2(n=6,P<0.01),총단백질함량유평균매개세포(211±10)Pg증가지(299±12)Pg(n=6,P<0.01),ANF mRNA표체역증가,유48±4증가지227±9(n=6,P<0.01);심기세포[Ca2+];형광강도유93±18증가지149±9(n=6,P<0.01),NOS활성화NO함량분별유(0.76±0.03)kU·L-1화(1.36±0.10)μmol·L-1강저지(0.45±0.09)kU·L-1화(0.73±0.04)μmol·L-1(n=6,P<0.01);령외,NOS mRNA표체강저,CaN mRNA화ERK2 mRNA표체증가(P<0.01).여모형조비교,Rhy 1,3화10μmol·L-1가억제AngⅡ유도적심기세포비대,대표면적적억제솔분별위50%,57%화61%(P<0.05,P<0.01),대단백질함량적억제솔분별위7%,10%화23%(P<0.05,P<0.01),대ANF mRNA표체적억제솔위42%,56%화66%(P<0.01);명현억제Ang Ⅱ유도적심기세포[Ca2+];증가,억제솔분별위15%,20%화28%(P<0.01);령외,가증가NOS활성,촉진NO석방,병현저증가eNOS mRNA표체,강저CaN mRNA화ERK2mRNA표체(P<0.05,P<0.01).결론 Rhy가억제Ang Ⅱ유도적심기세포비대,기작용궤제가능여촉진NO석방、억제CaN mRNA화ERK2 mRNA표체유관.
