微生物学报
微生物學報
미생물학보
ACTA MICROBIOLOGICA SINICA
2006年
1期
162-165
,共4页
何丽鸿%赵勇%陈明杰%潘迎捷
何麗鴻%趙勇%陳明傑%潘迎捷
하려홍%조용%진명걸%반영첩
堆肥%DNA的高效提取%高有机含量%DGGE
堆肥%DNA的高效提取%高有機含量%DGGE
퇴비%DNA적고효제취%고유궤함량%DGGE
采用化学裂解和酶解相结合的方法,选择加入PVPP的高盐缓冲液作为细胞裂解的反应体系,并以PEG-8000进行DNA沉淀,从高有机含量的堆肥样品中进行微生物总DNA的提取.结果表明,从4种性质不同的堆肥中均获得了高质量的微生物总DNA,所得的DNA分子片段在23kb左右;每克干重堆肥的总DNA提取量为63.54±12.08μg～106.50±28.36μg,A260/A280大于1.6,A260/A230大于1.8,不用经过纯化可以直接进行PCR扩增和限制性酶切;以该DNA为模板进行微生物区系的DGGE分析,显示了丰富的微生物多样性.该方法减少了通常环境样品DNA提取过程中的纯化步骤,减少了DNA的损失,为从事微生物分子生态学,尤其是那些针对高有机含量以及获取极为不易的环境样品的研究而言是十分有益的.
採用化學裂解和酶解相結閤的方法,選擇加入PVPP的高鹽緩遲液作為細胞裂解的反應體繫,併以PEG-8000進行DNA沉澱,從高有機含量的堆肥樣品中進行微生物總DNA的提取.結果錶明,從4種性質不同的堆肥中均穫得瞭高質量的微生物總DNA,所得的DNA分子片段在23kb左右;每剋榦重堆肥的總DNA提取量為63.54±12.08μg～106.50±28.36μg,A260/A280大于1.6,A260/A230大于1.8,不用經過純化可以直接進行PCR擴增和限製性酶切;以該DNA為模闆進行微生物區繫的DGGE分析,顯示瞭豐富的微生物多樣性.該方法減少瞭通常環境樣品DNA提取過程中的純化步驟,減少瞭DNA的損失,為從事微生物分子生態學,尤其是那些針對高有機含量以及穫取極為不易的環境樣品的研究而言是十分有益的.
채용화학렬해화매해상결합적방법,선택가입PVPP적고염완충액작위세포렬해적반응체계,병이PEG-8000진행DNA침정,종고유궤함량적퇴비양품중진행미생물총DNA적제취.결과표명,종4충성질불동적퇴비중균획득료고질량적미생물총DNA,소득적DNA분자편단재23kb좌우;매극간중퇴비적총DNA제취량위63.54±12.08μg～106.50±28.36μg,A260/A280대우1.6,A260/A230대우1.8,불용경과순화가이직접진행PCR확증화한제성매절;이해DNA위모판진행미생물구계적DGGE분석,현시료봉부적미생물다양성.해방법감소료통상배경양품DNA제취과정중적순화보취,감소료DNA적손실,위종사미생물분자생태학,우기시나사침대고유궤함량이급획취겁위불역적배경양품적연구이언시십분유익적.
