温州医学院学报
溫州醫學院學報
온주의학원학보
JOURNAL OF WENZHOU MEDICAL COLLEGE
2007年
2期
104-106
,共3页
赖娟%陈俊%张丽芳%夏克栋
賴娟%陳俊%張麗芳%夏剋棟
뢰연%진준%장려방%하극동
人乳头瘤病毒16%E7蛋白%原核表达%宫颈癌
人乳頭瘤病毒16%E7蛋白%原覈錶達%宮頸癌
인유두류병독16%E7단백%원핵표체%궁경암
目的:研究人乳头瘤病毒(Human papillomavirus HPV)16型E7在原核表达系统中的表达情况和活性,为制备HPV16型E7蛋白疫苗奠定实验基础.方法:通过聚合酶联反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)从HPV16 DNA阳性的宫颈癌组织中扩增HPV16 E7全长基因,进一步将其克隆入原核表达载体pET32a(+),并构建重组质粒pET32a(+)/HPV16 E7,经测序鉴定后转化大肠杆菌BL21(DE3),经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达的融合蛋白,用镍螯合亲和层析胶体(Ni-NTA Agarose)纯化,十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、蛋白质印迹法(Western blot,WB)分析鉴定.结果:测序证明成功构建重组质粒pET32a/HPV16E7,IPTG诱导下HPV16E7融合蛋白在大肠杆菌中得到高效表达,重组蛋白的表达量占菌体总蛋白的16%,蛋白质印迹鉴定重组E7蛋白与表达载体的标签蛋白形成相对分子质量约30×103的可溶性融合蛋白.结论:重组质粒pET32a/HPV16E7在大肠杆菌BL21中高效表达目的蛋白.
目的:研究人乳頭瘤病毒(Human papillomavirus HPV)16型E7在原覈錶達繫統中的錶達情況和活性,為製備HPV16型E7蛋白疫苗奠定實驗基礎.方法:通過聚閤酶聯反應(Polymerase Chain Reaction,PCR)從HPV16 DNA暘性的宮頸癌組織中擴增HPV16 E7全長基因,進一步將其剋隆入原覈錶達載體pET32a(+),併構建重組質粒pET32a(+)/HPV16 E7,經測序鑒定後轉化大腸桿菌BL21(DE3),經異丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)誘導錶達的融閤蛋白,用鎳螯閤親和層析膠體(Ni-NTA Agarose)純化,十二烷基磺痠鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)、蛋白質印跡法(Western blot,WB)分析鑒定.結果:測序證明成功構建重組質粒pET32a/HPV16E7,IPTG誘導下HPV16E7融閤蛋白在大腸桿菌中得到高效錶達,重組蛋白的錶達量佔菌體總蛋白的16%,蛋白質印跡鑒定重組E7蛋白與錶達載體的標籤蛋白形成相對分子質量約30×103的可溶性融閤蛋白.結論:重組質粒pET32a/HPV16E7在大腸桿菌BL21中高效錶達目的蛋白.
목적:연구인유두류병독(Human papillomavirus HPV)16형E7재원핵표체계통중적표체정황화활성,위제비HPV16형E7단백역묘전정실험기출.방법:통과취합매련반응(Polymerase Chain Reaction,PCR)종HPV16 DNA양성적궁경암조직중확증HPV16 E7전장기인,진일보장기극륭입원핵표체재체pET32a(+),병구건중조질립pET32a(+)/HPV16 E7,경측서감정후전화대장간균BL21(DE3),경이병기류대-β-D-반유당감(IPTG)유도표체적융합단백,용얼오합친화층석효체(Ni-NTA Agarose)순화,십이완기광산납-취병희선알응효전영(SDS-PAGE)、단백질인적법(Western blot,WB)분석감정.결과:측서증명성공구건중조질립pET32a/HPV16E7,IPTG유도하HPV16E7융합단백재대장간균중득도고효표체,중조단백적표체량점균체총단백적16%,단백질인적감정중조E7단백여표체재체적표첨단백형성상대분자질량약30×103적가용성융합단백.결론:중조질립pET32a/HPV16E7재대장간균BL21중고효표체목적단백.
