CAJ | 학술논문

目的:在体外不同培养条件下,脂肪来源间充质干细胞可以向成骨细胞、成软骨细胞、神经细胞、内皮细胞、肌肉细胞、脂肪细胞和肝脏细胞等不同胚层来源的细胞分化.观察脂肪间充质干细胞在体外培养并向类角质细胞分化的能力.方法:实验于2005-06/2006-03在解放军军事医学科学院完成.实验方法:取20～45岁健康女性(已取得患者同意)脂肪组织行脂肪抽吸术后的脂肪颗粒.参照Zuk等方法分离脂肪间充质干细胞.取培养的第3代细胞,采用流式细胞仪鉴定细胞表面分子及细胞周期.取状态良好、融合至瓶底80%的第20代细胞,在5 mg/L的秋水仙素处理后采集分裂细胞,以Giemsa染色进行核型分析.取第3代细胞以5 μm维甲酸和5 μg/L表皮细胞生长因子培养基向角质细胞诱导分化.对照组用含体积分数为0.05胎牛血清的L-DNMEM培养基.实验评估:采用倒置显微镜观察细胞形态,免疫组织化学方法检测角质细胞的标志物CK19.结果:①脂肪来源间充质干细胞表面分子CD29、CD90、CD44呈阳性,而CD34呈阴性.②细胞增殖曲线呈S型,接种的前3 d细胞处于滞留期,3 d后进入对数生长期,6 d后进入平台期,细胞的群体倍增时间约为29 h.处于对数生长期的细胞80%以上处于G0和G1期.③细胞染色体核型分析显示,染色体数目2n=46,核型46,xx,为女性正常核型.④对照组细胞贴壁后,呈成纤维细胞样,细胞呈长梭形,排列成漩涡状,贴壁较好.诱导组从诱导的第3天开始,细胞逐渐变成不规则,诱导第10天出现铺路石改变,形似角质细胞.⑤免疫组织化学方法检测显示,部分细胞专一地对CK19抗体呈阳性反应,有棕色染色.结论:可从人脂肪抽吸物中分离出间充质干细胞,脂肪间充质干细胞在体外一定条件下可向类角质细胞分化.
목적:재체외불동배양조건하,지방래원간충질간세포가이향성골세포、성연골세포、신경세포、내피세포、기육세포、지방세포화간장세포등불동배층래원적세포분화.관찰지방간충질간세포재체외배양병향류각질세포분화적능력.방법:실험우2005-06/2006-03재해방군군사의학과학원완성.실험방법:취20～45세건강녀성(이취득환자동의)지방조직행지방추흡술후적지방과립.삼조Zuk등방법분리지방간충질간세포.취배양적제3대세포,채용류식세포의감정세포표면분자급세포주기.취상태량호、융합지병저80%적제20대세포,재5 mg/L적추수선소처리후채집분렬세포,이Giemsa염색진행핵형분석.취제3대세포이5 μm유갑산화5 μg/L표피세포생장인자배양기향각질세포유도분화.대조조용함체적분수위0.05태우혈청적L-DNMEM배양기.실험평고:채용도치현미경관찰세포형태,면역조직화학방법검측각질세포적표지물CK19.결과:①지방래원간충질간세포표면분자CD29、CD90、CD44정양성,이CD34정음성.②세포증식곡선정S형,접충적전3 d세포처우체류기,3 d후진입대수생장기,6 d후진입평태기,세포적군체배증시간약위29 h.처우대수생장기적세포80%이상처우G0화G1기.③세포염색체핵형분석현시,염색체수목2n=46,핵형46,xx,위녀성정상핵형.④대조조세포첩벽후,정성섬유세포양,세포정장사형,배렬성선와상,첩벽교호.유도조종유도적제3천개시,세포축점변성불규칙,유도제10천출현포로석개변,형사각질세포.⑤면역조직화학방법검측현시,부분세포전일지대CK19항체정양성반응,유종색염색.결론:가종인지방추흡물중분리출간충질간세포,지방간충질간세포재체외일정조건하가향류각질세포분화.