CAJ | 학술논문

目的:已证实肿瘤坏死因子α在人工关节无菌性松动过程中发挥重要作用,依那西普为肿瘤坏死因子α拮抗剂,拟验证采用依那西普预防人工关节钛颗粒刺激巨噬细胞分泌肿瘤坏死因子α等细胞因子导致无菌性松动的可能性.方法:实验于2007-03/07在宁夏医学院生殖与遗传实验室完成(宁夏省部级重点实验室).①主要试剂与药物:依那西普 (Enbrel, Amgen and Wyeth),钛颗粒(美国ZIM-MER公司提供,微粒直径为3～5 μm).②小鼠腹腔巨噬细胞的分离、培养:麻醉后处死12只6～8周的清洁级BALB/C小鼠,腹腔注入无血清RPMI1640 培养液5 mL,3～5 min后,无菌条件下打开小鼠腹腔,吸取腹腔液,离心洗涤后显微镜下计数,调整细胞至3×109/L,均匀加入24孔培养板中,置于37 ℃、体积分数为0.05的CO2培养箱中培养.12 h后更换培养液,去掉未贴壁的细胞,得到巨噬细胞.实验过程中对动物处置符合动物伦理学要求.③评估指标:24 h后将培养细胞分为5组,每组有8个平行孔:单纯细胞组,1×1012/L钛颗粒组,1×1012 /L 钛颗粒+10 μg/L依那西普组,1×1012/L钛颗粒+100 μg/L 依那西普组,1×1012/L钛颗粒+1 000 μg/L依那西普组.继续培养18 h后,用酶联免疫法检测上述各组细胞上清液中肿瘤坏死因子α、白细胞介素1、白细胞介素6的浓度.结果:1×1012/L钛颗粒组细胞培养上清液肿瘤坏死因子α、白细胞介素6、白细胞介素1浓度明显高于单纯细胞组、1×1012/L钛颗粒+100,1 000 μg/L依那西普组(P < 0.001).1 000 μg/L依那西普组低于10 μg/L依那西普组,差异有显著性(P < 0.001).结论:依那西普呈剂量依赖性的有效抑制磨屑颗粒诱导的巨噬细胞分泌细胞因子,有望成为预防人工关节无菌性松动的药物.
목적:이증실종류배사인자α재인공관절무균성송동과정중발휘중요작용,의나서보위종류배사인자α길항제,의험증채용의나서보예방인공관절태과립자격거서세포분비종류배사인자α등세포인자도치무균성송동적가능성.방법:실험우2007-03/07재저하의학원생식여유전실험실완성(녕하성부급중점실험실).①주요시제여약물:의나서보 (Enbrel, Amgen and Wyeth),태과립(미국ZIM-MER공사제공,미립직경위3～5 μm).②소서복강거서세포적분리、배양:마취후처사12지6～8주적청길급BALB/C소서,복강주입무혈청RPMI1640 배양액5 mL,3～5 min후,무균조건하타개소서복강,흡취복강액,리심세조후현미경하계수,조정세포지3×109/L,균균가입24공배양판중,치우37 ℃、체적분수위0.05적CO2배양상중배양.12 h후경환배양액,거도미첩벽적세포,득도거서세포.실험과정중대동물처치부합동물윤리학요구.③평고지표:24 h후장배양세포분위5조,매조유8개평행공:단순세포조,1×1012/L태과립조,1×1012 /L 태과립+10 μg/L의나서보조,1×1012/L태과립+100 μg/L 의나서보조,1×1012/L태과립+1 000 μg/L의나서보조.계속배양18 h후,용매련면역법검측상술각조세포상청액중종류배사인자α、백세포개소1、백세포개소6적농도.결과:1×1012/L태과립조세포배양상청액종류배사인자α、백세포개소6、백세포개소1농도명현고우단순세포조、1×1012/L태과립+100,1 000 μg/L의나서보조(P < 0.001).1 000 μg/L의나서보조저우10 μg/L의나서보조,차이유현저성(P < 0.001).결론:의나서보정제량의뢰성적유효억제마설과립유도적거서세포분비세포인자,유망성위예방인공관절무균성송동적약물.