中国兽医科学
中國獸醫科學
중국수의과학
VETERINARY SCIENCE IN CHINA
2008年
5期
374-379
,共6页
敖艳华%陈晓春%廖明%蒋文泓%聂飞%任涛
敖豔華%陳曉春%廖明%蔣文泓%聶飛%任濤
오염화%진효춘%료명%장문홍%섭비%임도
新城疫病毒%F蛋白%抗原表位%原核表达
新城疫病毒%F蛋白%抗原錶位%原覈錶達
신성역병독%F단백%항원표위%원핵표체
利用已构建的新城疫病毒F基因重组质粒,通过氨基酸序列分析和InsightⅡ基因工作站的MODELER程序和同源模建技术,预测了试验株F蛋白的表面抗原分布位置.设计引物扩增了2段含有多个抗原位点的多肽片段,通过双酶切定向克隆到原核表达载体pET32a,获得了重组质粒pET32a-F1和pET32a-F2以及2个片段串联起来后克隆的重组质粒pET32a-F3.重组质粒经诱导表达并取产物进行分析,结果显示,F1、F2、F3片段均获得了融合表达.Western-blotting证实,表达产物F1、F2和F3与NDV阳性血清均具有免疫反应性.用表达的重组蛋白加免疫佐剂经皮下接种免疫鸡,免疫2次后产生较高的抗体水平,用100 LD50的超强毒株GD-05-2攻击,重组蛋白免疫组鸡可达到约70%的保护率,并可显著抑制排毒.
利用已構建的新城疫病毒F基因重組質粒,通過氨基痠序列分析和InsightⅡ基因工作站的MODELER程序和同源模建技術,預測瞭試驗株F蛋白的錶麵抗原分佈位置.設計引物擴增瞭2段含有多箇抗原位點的多肽片段,通過雙酶切定嚮剋隆到原覈錶達載體pET32a,穫得瞭重組質粒pET32a-F1和pET32a-F2以及2箇片段串聯起來後剋隆的重組質粒pET32a-F3.重組質粒經誘導錶達併取產物進行分析,結果顯示,F1、F2、F3片段均穫得瞭融閤錶達.Western-blotting證實,錶達產物F1、F2和F3與NDV暘性血清均具有免疫反應性.用錶達的重組蛋白加免疫佐劑經皮下接種免疫鷄,免疫2次後產生較高的抗體水平,用100 LD50的超彊毒株GD-05-2攻擊,重組蛋白免疫組鷄可達到約70%的保護率,併可顯著抑製排毒.
이용이구건적신성역병독F기인중조질립,통과안기산서렬분석화InsightⅡ기인공작참적MODELER정서화동원모건기술,예측료시험주F단백적표면항원분포위치.설계인물확증료2단함유다개항원위점적다태편단,통과쌍매절정향극륭도원핵표체재체pET32a,획득료중조질립pET32a-F1화pET32a-F2이급2개편단천련기래후극륭적중조질립pET32a-F3.중조질립경유도표체병취산물진행분석,결과현시,F1、F2、F3편단균획득료융합표체.Western-blotting증실,표체산물F1、F2화F3여NDV양성혈청균구유면역반응성.용표체적중조단백가면역좌제경피하접충면역계,면역2차후산생교고적항체수평,용100 LD50적초강독주GD-05-2공격,중조단백면역조계가체도약70%적보호솔,병가현저억제배독.
