军医进修学院学报
軍醫進脩學院學報
군의진수학원학보
ACADEMIC JOURNAL OF PLA POSTGRADUATE MEDICAL SCHOOL
2010年
11期
1129-1131,1144
,共4页
冯玉环%李月红%吴小华%易建平
馮玉環%李月紅%吳小華%易建平
풍옥배%리월홍%오소화%역건평
慢病毒属%PIK3CA%RNA干扰%转染%293T
慢病毒屬%PIK3CA%RNA榦擾%轉染%293T
만병독속%PIK3CA%RNA간우%전염%293T
目的 构建靶向PIK3CA(P110α)基因的RNA干扰慢病毒载体.方法 针对PIK3CA-mRNA(NM_006218)设计4个RNA干扰靶点序列和一个阴性对照靶点,构建慢病毒转移质粒pGCL-GFP.构建成功的RNA干扰质粒与PIK3CA表达质粒共转染293T细胞,荧光显微镜下观测转染效果,Western Blot检测PIK3CA蛋白表达,筛选出干扰效果最好的RNA干扰质粒.将该质粒与两种辅助包装原件载体质粒共转染293T细胞,包装成慢病毒并检测其滴度.结果 4个靶点和阴性对照靶点的RNA干扰质粒均构建成功;通过Western Blot检测获得最有效干扰靶点,并成功包装成滴度为2×108TU/ml的慢病毒.结论 成功构建可供感染的PIK3CA基因RNA干扰慢病毒载体,为进一步研究PIK3CA功能和用慢病毒进行卵巢癌基因治疗奠定了基础.
目的 構建靶嚮PIK3CA(P110α)基因的RNA榦擾慢病毒載體.方法 針對PIK3CA-mRNA(NM_006218)設計4箇RNA榦擾靶點序列和一箇陰性對照靶點,構建慢病毒轉移質粒pGCL-GFP.構建成功的RNA榦擾質粒與PIK3CA錶達質粒共轉染293T細胞,熒光顯微鏡下觀測轉染效果,Western Blot檢測PIK3CA蛋白錶達,篩選齣榦擾效果最好的RNA榦擾質粒.將該質粒與兩種輔助包裝原件載體質粒共轉染293T細胞,包裝成慢病毒併檢測其滴度.結果 4箇靶點和陰性對照靶點的RNA榦擾質粒均構建成功;通過Western Blot檢測穫得最有效榦擾靶點,併成功包裝成滴度為2×108TU/ml的慢病毒.結論 成功構建可供感染的PIK3CA基因RNA榦擾慢病毒載體,為進一步研究PIK3CA功能和用慢病毒進行卵巢癌基因治療奠定瞭基礎.
목적 구건파향PIK3CA(P110α)기인적RNA간우만병독재체.방법 침대PIK3CA-mRNA(NM_006218)설계4개RNA간우파점서렬화일개음성대조파점,구건만병독전이질립pGCL-GFP.구건성공적RNA간우질립여PIK3CA표체질립공전염293T세포,형광현미경하관측전염효과,Western Blot검측PIK3CA단백표체,사선출간우효과최호적RNA간우질립.장해질립여량충보조포장원건재체질립공전염293T세포,포장성만병독병검측기적도.결과 4개파점화음성대조파점적RNA간우질립균구건성공;통과Western Blot검측획득최유효간우파점,병성공포장성적도위2×108TU/ml적만병독.결론 성공구건가공감염적PIK3CA기인RNA간우만병독재체,위진일보연구PIK3CA공능화용만병독진행란소암기인치료전정료기출.
