猪链球菌WC-SS7株GDH基因的表达及GDH蛋白单克隆抗体的制备
저련구균WC-SS7주GDH기인적표체급GDH단백단극륭항체적제비
Expression of GDH gene of Streptococcus suis and preparation of monoclonal antibody against GDH protein
  • 万方数据
    中国人兽共患病学报 중국인수공환병학보
    CHINESE JOURNAL OF ZOONOSES
    2009年 10期 980-983 ,共4页

    王淑杰%徐敏%蔡雪辉%武佳斌%刘永刚%王洪峰%石文达%李丽琴%徐明明%荣福龙

    왕숙걸%서민%채설휘%무가빈%류영강%왕홍봉%석문체%리려금%서명명%영복룡

    猪链球菌%GDH蛋白%原核表达%单克隆抗体 豬鏈毬菌%GDH蛋白%原覈錶達%單剋隆抗體
    저련구균%GDH단백%원핵표체%단극륭항체
    目的 原核表达猪链球菌7型临床分离株WC-SS7的GDH蛋白,制备抗GDH蛋白的单克隆抗体(mAb).方法 将临床分离的猪链球菌7型WC-SS7株的GDH基因克隆入表达载体pET-30a,转入大肠杆菌中,用IPTG诱导表达,用Ni化琼脂糖柱(Pierce)纯化的GDH蛋白免疫BALB/c小鼠,取鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,通过间接ELISA方法筛选阳性克隆,对抗WC-SS7 GDH蛋白单克隆抗体进行特异性鉴定及亚型鉴定.结果 表达产物经SDS-PAGE凝胶电泳分析后,在约为52KD处可见一条明显的诱导表达带,说明GDH蛋白得到了正确的表达;细胞融合后检测为阳性的细胞株经过3次单克隆筛选,最终得到了6株能和GDH蛋白反应的能稳定分泌单抗的阳性细胞克隆,这些单抗通过Western 鉴定结果显示其具有良好的特异性,6株单克隆抗体亚型鉴定结果显示其亚型均为IgG1型,且轻链均为κ链.结论 本研究成功表达了WC-SS7的GDH蛋白,并获得了6株能和GDH蛋白反应的、能稳定分泌单抗的阳性细胞克隆,所获得的重组GDH蛋白及特异性单克隆抗体能用于猪链球菌结构和功能的研究,为猪链球菌临床感染血清学诊断方法的建立奠定基础.
    목적 원핵표체저련구균7형림상분리주WC-SS7적GDH단백,제비항GDH단백적단극륭항체(mAb).방법 장림상분리적저련구균7형WC-SS7주적GDH기인극륭입표체재체pET-30a,전입대장간균중,용IPTG유도표체,용Ni화경지당주(Pierce)순화적GDH단백면역BALB/c소서,취서비세포여SP2/0골수류세포융합,통과간접ELISA방법사선양성극륭,대항WC-SS7 GDH단백단극륭항체진행특이성감정급아형감정.결과 표체산물경SDS-PAGE응효전영분석후,재약위52KD처가견일조명현적유도표체대,설명GDH단백득도료정학적표체;세포융합후검측위양성적세포주경과3차단극륭사선,최종득도료6주능화GDH단백반응적능은정분비단항적양성세포극륭,저사단항통과Western 감정결과현시기구유량호적특이성,6주단극륭항체아형감정결과현시기아형균위IgG1형,차경련균위κ련.결론 본연구성공표체료WC-SS7적GDH단백,병획득료6주능화GDH단백반응적、능은정분비단항적양성세포극륭,소획득적중조GDH단백급특이성단극륭항체능용우저련구균결구화공능적연구,위저련구균림상감염혈청학진단방법적건립전정기출.
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