世界华人消化杂志
世界華人消化雜誌
세계화인소화잡지
WORLD CHINESE JOURNAL OF DIGESTOLOGY
2010年
11期
1109-1114
,共6页
胡志亮%谭德明%侯周华%谢萍%刘国珍%欧阳奕%刘菲%刘洪波
鬍誌亮%譚德明%侯週華%謝萍%劉國珍%歐暘奕%劉菲%劉洪波
호지량%담덕명%후주화%사평%류국진%구양혁%류비%류홍파
HBx%突变%增殖%细胞周期
HBx%突變%增殖%細胞週期
HBx%돌변%증식%세포주기
目的:建立稳定表达HBx基因缺失突变体(HBx-d382)的L02肝细胞株,并探讨其对L02细胞增殖的影响.方法:含HBx-d382重组质粒(pCDNA3.0/HBx-d382)经过PCR扩增、双酶切及测序鉴定后,通过脂质体转染和G418筛选获得稳定表达HBx-d382的L02肝细胞株.PCR鉴定基因组中HBx-d382基因整合.RT-PCR和Western blot鉴定其表达,进一步通过MTT法,软琼脂克隆形成实验检测HBx-d382对L02细胞增殖及非锚定依赖生长能力的影响.用流式细胞仪检测其对细胞周期的影响.结果:经PCR扩增、双酶切及测序鉴定HBx-d382重组质粒构建正确.稳定转染该质粒的L02细胞基因组存在HBx-d382整合.RT-PCI汲Western blot表明在RNA水平和蛋白水平存在HBx-d382表达,稳定表达HBx-d382的L02细胞其增殖能力和非锚定生长能力增强,S+G2期细胞比例升高.结论:成功构建了HBx缺失突变体的真核表达模型,证实HBx缺失突变体能影响细胞增殖,这种效应可能与其影响细胞周期调控相关.
目的:建立穩定錶達HBx基因缺失突變體(HBx-d382)的L02肝細胞株,併探討其對L02細胞增殖的影響.方法:含HBx-d382重組質粒(pCDNA3.0/HBx-d382)經過PCR擴增、雙酶切及測序鑒定後,通過脂質體轉染和G418篩選穫得穩定錶達HBx-d382的L02肝細胞株.PCR鑒定基因組中HBx-d382基因整閤.RT-PCR和Western blot鑒定其錶達,進一步通過MTT法,軟瓊脂剋隆形成實驗檢測HBx-d382對L02細胞增殖及非錨定依賴生長能力的影響.用流式細胞儀檢測其對細胞週期的影響.結果:經PCR擴增、雙酶切及測序鑒定HBx-d382重組質粒構建正確.穩定轉染該質粒的L02細胞基因組存在HBx-d382整閤.RT-PCI伋Western blot錶明在RNA水平和蛋白水平存在HBx-d382錶達,穩定錶達HBx-d382的L02細胞其增殖能力和非錨定生長能力增彊,S+G2期細胞比例升高.結論:成功構建瞭HBx缺失突變體的真覈錶達模型,證實HBx缺失突變體能影響細胞增殖,這種效應可能與其影響細胞週期調控相關.
목적:건립은정표체HBx기인결실돌변체(HBx-d382)적L02간세포주,병탐토기대L02세포증식적영향.방법:함HBx-d382중조질립(pCDNA3.0/HBx-d382)경과PCR확증、쌍매절급측서감정후,통과지질체전염화G418사선획득은정표체HBx-d382적L02간세포주.PCR감정기인조중HBx-d382기인정합.RT-PCR화Western blot감정기표체,진일보통과MTT법,연경지극륭형성실험검측HBx-d382대L02세포증식급비묘정의뢰생장능력적영향.용류식세포의검측기대세포주기적영향.결과:경PCR확증、쌍매절급측서감정HBx-d382중조질립구건정학.은정전염해질립적L02세포기인조존재HBx-d382정합.RT-PCI급Western blot표명재RNA수평화단백수평존재HBx-d382표체,은정표체HBx-d382적L02세포기증식능력화비묘정생장능력증강,S+G2기세포비례승고.결론:성공구건료HBx결실돌변체적진핵표체모형,증실HBx결실돌변체능영향세포증식,저충효응가능여기영향세포주기조공상관.
