中山大学学报（医学科学版）
中山大學學報（醫學科學版）
중산대학학보（의학과학판）
JOURNAL OF SUN YAT-SEN UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCES)
2010年
4期
486-490
,共5页
黄灿%王乐旬%胡旭初%余新炳%黄艳%邓传欢%徐劲
黃燦%王樂旬%鬍旭初%餘新炳%黃豔%鄧傳歡%徐勁
황찬%왕악순%호욱초%여신병%황염%산전환%서경
华支睾吸虫%乳酸脱氢酶%表位
華支睪吸蟲%乳痠脫氫酶%錶位
화지고흡충%유산탈경매%표위
[目的]原核克隆及表达华支睾吸虫乳酸脱氢酶(CsLDH)两个表位aa10-20(E10-20)及aa94-102(E94-102),初步研究两表位与CsLDH免疫学及酶学相互关系.[方法]将E10-20及E94-102克隆至pGEX-4T-1载体,表达纯化重组蛋白,用Western Blotting和间接ELISA法检测CsLDH免疫血清对表位霞组蛋白的识别,同时检测两表位重组蛋白的免疫血清对CsLDH蛋白的识别;利用CsLDH标准酶活性反应体系.比较两表位免疫血清与CsLDH免疫血清对CsLDH催化丙酮酸还原成乳酸反应的影响.[结果]成功构建pGEX-4T-1-E1010-20及pGEX-4T-1-E94-10重组质粒,SDS.PAGE鉴定表达的重组蛋白,菌体裂解液经亲和层析纯化,获得与GST融合表达的蛋白E10-20及E94-102.两表位重组蛋白均可被CsLDH免疫血清识别,而对E94-10更易于识别;重组CsLDH也能被E10-20及E94-102免疫血清识别,而不能被对照血清识别.E94-10免疫血清能抑制CsLDH催化丙酮酸还原成乳酸的反应.[结论]表位结构和功能研究深化了对CsLDH结构的理解,并为开辟CsLDH疫苗研究新路径奠定基础.
[目的]原覈剋隆及錶達華支睪吸蟲乳痠脫氫酶(CsLDH)兩箇錶位aa10-20(E10-20)及aa94-102(E94-102),初步研究兩錶位與CsLDH免疫學及酶學相互關繫.[方法]將E10-20及E94-102剋隆至pGEX-4T-1載體,錶達純化重組蛋白,用Western Blotting和間接ELISA法檢測CsLDH免疫血清對錶位霞組蛋白的識彆,同時檢測兩錶位重組蛋白的免疫血清對CsLDH蛋白的識彆;利用CsLDH標準酶活性反應體繫.比較兩錶位免疫血清與CsLDH免疫血清對CsLDH催化丙酮痠還原成乳痠反應的影響.[結果]成功構建pGEX-4T-1-E1010-20及pGEX-4T-1-E94-10重組質粒,SDS.PAGE鑒定錶達的重組蛋白,菌體裂解液經親和層析純化,穫得與GST融閤錶達的蛋白E10-20及E94-102.兩錶位重組蛋白均可被CsLDH免疫血清識彆,而對E94-10更易于識彆;重組CsLDH也能被E10-20及E94-102免疫血清識彆,而不能被對照血清識彆.E94-10免疫血清能抑製CsLDH催化丙酮痠還原成乳痠的反應.[結論]錶位結構和功能研究深化瞭對CsLDH結構的理解,併為開闢CsLDH疫苗研究新路徑奠定基礎.
[목적]원핵극륭급표체화지고흡충유산탈경매(CsLDH)량개표위aa10-20(E10-20)급aa94-102(E94-102),초보연구량표위여CsLDH면역학급매학상호관계.[방법]장E10-20급E94-102극륭지pGEX-4T-1재체,표체순화중조단백,용Western Blotting화간접ELISA법검측CsLDH면역혈청대표위하조단백적식별,동시검측량표위중조단백적면역혈청대CsLDH단백적식별;이용CsLDH표준매활성반응체계.비교량표위면역혈청여CsLDH면역혈청대CsLDH최화병동산환원성유산반응적영향.[결과]성공구건pGEX-4T-1-E1010-20급pGEX-4T-1-E94-10중조질립,SDS.PAGE감정표체적중조단백,균체렬해액경친화층석순화,획득여GST융합표체적단백E10-20급E94-102.량표위중조단백균가피CsLDH면역혈청식별,이대E94-10경역우식별;중조CsLDH야능피E10-20급E94-102면역혈청식별,이불능피대조혈청식별.E94-10면역혈청능억제CsLDH최화병동산환원성유산적반응.[결론]표위결구화공능연구심화료대CsLDH결구적리해,병위개벽CsLDH역묘연구신로경전정기출.
