生物技术通讯
生物技術通訊
생물기술통신
LETTERS IN BIOTECHNOLOGY
2011年
3期
344-348,353
,共6页
乙型脑炎病毒%E蛋白%重组减毒沙门菌%活载体疫苗
乙型腦炎病毒%E蛋白%重組減毒沙門菌%活載體疫苗
을형뇌염병독%E단백%중조감독사문균%활재체역묘
目的:构建表达乙型脑炎病毒(JEV)E蛋白的口服重组减毒鼠伤寒沙门菌活载体疫苗株.方法:克隆JEV E基因,将其插入表达载体pYA3341中,构建重组质粒pYA3341-E,将重组质粒电转入鼠伤寒沙门菌疫苗株X4550(缺失asd、cya、crp基因),获得重组疫苗菌株X4550(pYA3341-E);鉴定重组菌E蛋白的表达,测定重组菌的稳定性、生长曲线、安全性,以及小鼠的免疫试验和血清中和试验.结果:酶切鉴定和序列测定证实重组质粒构建成功;SDS-PAGE检测有目的蛋白条带;Western印迹证实表达的E蛋白能与猪抗JEV阳性血清特异性结合;重组菌株在体外营养选择压力下,可稳定地携带重组质粒传代繁殖,在体内可较稳定地定居于肠系膜淋巴结和脾脏、小鼠口服试验证实重组菌无毒性作用,安全可靠;小鼠口服重组菌免疫,ELISA检测产生了抗JEV抗体;中和试验表明产生的抗体具有中和活性.结论:构建了能稳定表达JEV E蛋白的口服减毒鼠伤寒沙门菌疫苗株X4550(pYA3341-E),为研究乙型脑炎口服基因工程疫苗奠定基础.
目的:構建錶達乙型腦炎病毒(JEV)E蛋白的口服重組減毒鼠傷寒沙門菌活載體疫苗株.方法:剋隆JEV E基因,將其插入錶達載體pYA3341中,構建重組質粒pYA3341-E,將重組質粒電轉入鼠傷寒沙門菌疫苗株X4550(缺失asd、cya、crp基因),穫得重組疫苗菌株X4550(pYA3341-E);鑒定重組菌E蛋白的錶達,測定重組菌的穩定性、生長麯線、安全性,以及小鼠的免疫試驗和血清中和試驗.結果:酶切鑒定和序列測定證實重組質粒構建成功;SDS-PAGE檢測有目的蛋白條帶;Western印跡證實錶達的E蛋白能與豬抗JEV暘性血清特異性結閤;重組菌株在體外營養選擇壓力下,可穩定地攜帶重組質粒傳代繁殖,在體內可較穩定地定居于腸繫膜淋巴結和脾髒、小鼠口服試驗證實重組菌無毒性作用,安全可靠;小鼠口服重組菌免疫,ELISA檢測產生瞭抗JEV抗體;中和試驗錶明產生的抗體具有中和活性.結論:構建瞭能穩定錶達JEV E蛋白的口服減毒鼠傷寒沙門菌疫苗株X4550(pYA3341-E),為研究乙型腦炎口服基因工程疫苗奠定基礎.
목적:구건표체을형뇌염병독(JEV)E단백적구복중조감독서상한사문균활재체역묘주.방법:극륭JEV E기인,장기삽입표체재체pYA3341중,구건중조질립pYA3341-E,장중조질립전전입서상한사문균역묘주X4550(결실asd、cya、crp기인),획득중조역묘균주X4550(pYA3341-E);감정중조균E단백적표체,측정중조균적은정성、생장곡선、안전성,이급소서적면역시험화혈청중화시험.결과:매절감정화서렬측정증실중조질립구건성공;SDS-PAGE검측유목적단백조대;Western인적증실표체적E단백능여저항JEV양성혈청특이성결합;중조균주재체외영양선택압력하,가은정지휴대중조질립전대번식,재체내가교은정지정거우장계막림파결화비장、소서구복시험증실중조균무독성작용,안전가고;소서구복중조균면역,ELISA검측산생료항JEV항체;중화시험표명산생적항체구유중화활성.결론:구건료능은정표체JEV E단백적구복감독서상한사문균역묘주X4550(pYA3341-E),위연구을형뇌염구복기인공정역묘전정기출.
