中华实验外科杂志
中華實驗外科雜誌
중화실험외과잡지
CHINESE JOURNAL OF EXPERIMENTAL SURGERY
2007年
12期
1483-1485
,共3页
彭林辉%张柏和%张琪%苏长青%崔贞福%钱炎珍%吴孟超%钱其军
彭林輝%張柏和%張琪%囌長青%崔貞福%錢炎珍%吳孟超%錢其軍
팽림휘%장백화%장기%소장청%최정복%전염진%오맹초%전기군
腺病毒%端粒酶%生物治疗%肿瘤%干扰素-γ
腺病毒%耑粒酶%生物治療%腫瘤%榦擾素-γ
선병독%단립매%생물치료%종류%간우소-γ
目的 研制出一种携带抗癌基因的选择增殖型腺病毒载体系统.方法 克隆鼠干扰素(IFN)-γ基因序列,利用分子克隆技术将其插入肿瘤特异性增殖病毒的病毒基因组中,得到腺病毒载体质粒pSG300-m IFN-γ.通过pSG300-m IFN-γ与质粒pBHGE3在293细胞中同源重组得到重组病毒CNHK300-mIFN-γ.扩增、纯化病毒,用TCID50方法测病毒滴度.通过病毒增殖实验观察重组病毒的选择性增殖能力,通过Western blot检测腺病毒蛋白的表达,通过双抗体夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)检测重组病毒在不同细胞及不同时相的mIFN-γ表达量.结果 成功构建了携带治疗基因的增殖型腺病毒CNHK300-mIFN-γ,病毒滴度为1.0×109 pfu/ml,增殖实验证实CNHK300-mIFN-γ可以选择性地在端粒酶阳性肿瘤中增殖,Western blot分析结果显示腺病毒的E1A蛋白选择性在端粒酶阳性的肿瘤细胞中表达,ELISA显示CNHK300-mIFN-γ感染端粒酶阳性肿瘤后有大量mIFN-γ的表达,并随着感染的时间表达量也相应上升.结论 CNHK300-mIFN-γ为肿瘤的生物治疗提供了一种新的策略.
目的 研製齣一種攜帶抗癌基因的選擇增殖型腺病毒載體繫統.方法 剋隆鼠榦擾素(IFN)-γ基因序列,利用分子剋隆技術將其插入腫瘤特異性增殖病毒的病毒基因組中,得到腺病毒載體質粒pSG300-m IFN-γ.通過pSG300-m IFN-γ與質粒pBHGE3在293細胞中同源重組得到重組病毒CNHK300-mIFN-γ.擴增、純化病毒,用TCID50方法測病毒滴度.通過病毒增殖實驗觀察重組病毒的選擇性增殖能力,通過Western blot檢測腺病毒蛋白的錶達,通過雙抗體夾心法酶聯免疫吸附試驗(ELISA)檢測重組病毒在不同細胞及不同時相的mIFN-γ錶達量.結果 成功構建瞭攜帶治療基因的增殖型腺病毒CNHK300-mIFN-γ,病毒滴度為1.0×109 pfu/ml,增殖實驗證實CNHK300-mIFN-γ可以選擇性地在耑粒酶暘性腫瘤中增殖,Western blot分析結果顯示腺病毒的E1A蛋白選擇性在耑粒酶暘性的腫瘤細胞中錶達,ELISA顯示CNHK300-mIFN-γ感染耑粒酶暘性腫瘤後有大量mIFN-γ的錶達,併隨著感染的時間錶達量也相應上升.結論 CNHK300-mIFN-γ為腫瘤的生物治療提供瞭一種新的策略.
목적 연제출일충휴대항암기인적선택증식형선병독재체계통.방법 극륭서간우소(IFN)-γ기인서렬,이용분자극륭기술장기삽입종류특이성증식병독적병독기인조중,득도선병독재체질립pSG300-m IFN-γ.통과pSG300-m IFN-γ여질립pBHGE3재293세포중동원중조득도중조병독CNHK300-mIFN-γ.확증、순화병독,용TCID50방법측병독적도.통과병독증식실험관찰중조병독적선택성증식능력,통과Western blot검측선병독단백적표체,통과쌍항체협심법매련면역흡부시험(ELISA)검측중조병독재불동세포급불동시상적mIFN-γ표체량.결과 성공구건료휴대치료기인적증식형선병독CNHK300-mIFN-γ,병독적도위1.0×109 pfu/ml,증식실험증실CNHK300-mIFN-γ가이선택성지재단립매양성종류중증식,Western blot분석결과현시선병독적E1A단백선택성재단립매양성적종류세포중표체,ELISA현시CNHK300-mIFN-γ감염단립매양성종류후유대량mIFN-γ적표체,병수착감염적시간표체량야상응상승.결론 CNHK300-mIFN-γ위종류적생물치료제공료일충신적책략.
