华中科技大学学报(医学版)
華中科技大學學報(醫學版)
화중과기대학학보(의학판)
JOURNAL OF HUAZHONG UNIVERSITY OF SCIENCE AND TECHNOLOGY(HEALTH SCIENCES)
2011年
1期
80-83,87
,共5页
李学军%宋善俊%魏文宁%李永敢%孙碧红
李學軍%宋善俊%魏文寧%李永敢%孫碧紅
리학군%송선준%위문저%리영감%손벽홍
凝血酶原酶,fgl2%真核表达%促凝活性%激光共聚焦显微镜
凝血酶原酶,fgl2%真覈錶達%促凝活性%激光共聚焦顯微鏡
응혈매원매,fgl2%진핵표체%촉응활성%격광공취초현미경
目的 将人fgl2凝血酶原酶基因进行真核表达,了解表达蛋白的分布特点,初步研究其凝血活性.方法 将pcDNA3-fgl2重组质粒转化大肠埃希菌,利用脂质体转染至HL-60细胞;RT-PCR法检测其fgl2凝血酶原酶mRNA的表达,间接免疫荧光法标记fgl2凝血酶原酶蛋白,应用激光共聚焦显微镜观察其分布,流式细胞仪检测fgl2凝血酶原酶蛋白在细胞膜的表达;并通过检测转染细胞的促凝活性(PCA)分析其凝血功能.结果 pcDNA3-fgl2真核表达质粒在HL-60细胞中进行了瞬时表达,转染细胞可见明显的fgl2凝血酶原酶 mRNA条带.激光共聚焦显微镜观察到转染细胞胞质中可见明显的绿色荧光,流式细胞仪在转染细胞胞膜上未检测到明显的蛋白表达.转染pcDNA3-fgl2重组质粒细胞的PCA明显增高且依赖于凝血酶原.结论 成功地将fgl2凝血酶原酶基因在HL-60细胞中进行了瞬时表达;fgl2凝血酶原酶主要在胞质中表达,细胞膜上无分布并可能分泌到细胞外;凝血功能分析显示fgl2凝血酶原酶具有直接激活凝血酶原的功能.
目的 將人fgl2凝血酶原酶基因進行真覈錶達,瞭解錶達蛋白的分佈特點,初步研究其凝血活性.方法 將pcDNA3-fgl2重組質粒轉化大腸埃希菌,利用脂質體轉染至HL-60細胞;RT-PCR法檢測其fgl2凝血酶原酶mRNA的錶達,間接免疫熒光法標記fgl2凝血酶原酶蛋白,應用激光共聚焦顯微鏡觀察其分佈,流式細胞儀檢測fgl2凝血酶原酶蛋白在細胞膜的錶達;併通過檢測轉染細胞的促凝活性(PCA)分析其凝血功能.結果 pcDNA3-fgl2真覈錶達質粒在HL-60細胞中進行瞭瞬時錶達,轉染細胞可見明顯的fgl2凝血酶原酶 mRNA條帶.激光共聚焦顯微鏡觀察到轉染細胞胞質中可見明顯的綠色熒光,流式細胞儀在轉染細胞胞膜上未檢測到明顯的蛋白錶達.轉染pcDNA3-fgl2重組質粒細胞的PCA明顯增高且依賴于凝血酶原.結論 成功地將fgl2凝血酶原酶基因在HL-60細胞中進行瞭瞬時錶達;fgl2凝血酶原酶主要在胞質中錶達,細胞膜上無分佈併可能分泌到細胞外;凝血功能分析顯示fgl2凝血酶原酶具有直接激活凝血酶原的功能.
목적 장인fgl2응혈매원매기인진행진핵표체,료해표체단백적분포특점,초보연구기응혈활성.방법 장pcDNA3-fgl2중조질립전화대장애희균,이용지질체전염지HL-60세포;RT-PCR법검측기fgl2응혈매원매mRNA적표체,간접면역형광법표기fgl2응혈매원매단백,응용격광공취초현미경관찰기분포,류식세포의검측fgl2응혈매원매단백재세포막적표체;병통과검측전염세포적촉응활성(PCA)분석기응혈공능.결과 pcDNA3-fgl2진핵표체질립재HL-60세포중진행료순시표체,전염세포가견명현적fgl2응혈매원매 mRNA조대.격광공취초현미경관찰도전염세포포질중가견명현적록색형광,류식세포의재전염세포포막상미검측도명현적단백표체.전염pcDNA3-fgl2중조질립세포적PCA명현증고차의뢰우응혈매원.결론 성공지장fgl2응혈매원매기인재HL-60세포중진행료순시표체;fgl2응혈매원매주요재포질중표체,세포막상무분포병가능분비도세포외;응혈공능분석현시fgl2응혈매원매구유직접격활응혈매원적공능.
