毒理学杂志
毒理學雜誌
독이학잡지
JOURNAL OF HEALTH TOXICOLOGY
2006年
1期
7-9
,共3页
肖勇梅%刘移民%魏青%招小林%侯孟君%凌文华
肖勇梅%劉移民%魏青%招小林%侯孟君%凌文華
초용매%류이민%위청%초소림%후맹군%릉문화
细胞色素P450(CYP1A1)%T-载体%测序分析
細胞色素P450(CYP1A1)%T-載體%測序分析
세포색소P450(CYP1A1)%T-재체%측서분석
目的构建含KpnI、XhoI双酶切位点的人细胞色素(CYP1A1)基因cDNA全长的pGEM-T载体,为以后的亚克隆和毒理学研究提供实验材料.方法从培养的人乳腺癌细胞(MCF-7)中抽提总RNA,RT-PCR扩增CYP1A1基因cDNA全长,与pGEM-T载体连接后转化DH5α,筛选阳性克隆,抽提重组质粒并进行PCR及酶切鉴定,再行测序分析.结果重组质粒pGEM-T-1A1 PCR后获得了1 568 bp产物,酶切鉴定证实目的片段成功插入至pGEM-T,测序分析也进一步证明了目的片段与GeneBank中CYP1A1mRNA的序列同源性为99.9%.结论成功地构建了含CYP1A1基因cDNA全长区域的T载体.
目的構建含KpnI、XhoI雙酶切位點的人細胞色素(CYP1A1)基因cDNA全長的pGEM-T載體,為以後的亞剋隆和毒理學研究提供實驗材料.方法從培養的人乳腺癌細胞(MCF-7)中抽提總RNA,RT-PCR擴增CYP1A1基因cDNA全長,與pGEM-T載體連接後轉化DH5α,篩選暘性剋隆,抽提重組質粒併進行PCR及酶切鑒定,再行測序分析.結果重組質粒pGEM-T-1A1 PCR後穫得瞭1 568 bp產物,酶切鑒定證實目的片段成功插入至pGEM-T,測序分析也進一步證明瞭目的片段與GeneBank中CYP1A1mRNA的序列同源性為99.9%.結論成功地構建瞭含CYP1A1基因cDNA全長區域的T載體.
목적구건함KpnI、XhoI쌍매절위점적인세포색소(CYP1A1)기인cDNA전장적pGEM-T재체,위이후적아극륭화독이학연구제공실험재료.방법종배양적인유선암세포(MCF-7)중추제총RNA,RT-PCR확증CYP1A1기인cDNA전장,여pGEM-T재체련접후전화DH5α,사선양성극륭,추제중조질립병진행PCR급매절감정,재행측서분석.결과중조질립pGEM-T-1A1 PCR후획득료1 568 bp산물,매절감정증실목적편단성공삽입지pGEM-T,측서분석야진일보증명료목적편단여GeneBank중CYP1A1mRNA적서렬동원성위99.9%.결론성공지구건료함CYP1A1기인cDNA전장구역적T재체.
