应用与环境生物学报
應用與環境生物學報
응용여배경생물학보
CHINESE JOURNAL OF APPLIED & ENVIRONMENTAL BIOLOGY
2006年
6期
819-823
,共5页
李德华%苟兴华%胡海洋%徐琦%刘忠荣%吴洽庆%余晓东
李德華%茍興華%鬍海洋%徐琦%劉忠榮%吳洽慶%餘曉東
리덕화%구흥화%호해양%서기%류충영%오흡경%여효동
肠激酶(enterokinase,EK)%甲醇酵母(Pichia pastoris)%高密度发酵
腸激酶(enterokinase,EK)%甲醇酵母(Pichia pastoris)%高密度髮酵
장격매(enterokinase,EK)%갑순효모(Pichia pastoris)%고밀도발효
肠激酶(enterokinase, EK)是一种专一识别DDDDK氨基酸序列、并水解K后肽键的丝氨酸蛋白水解酶.根据GenBank序列进行人工合成牛肠激酶轻链基因cDNA,测序正确后将其插入甲醇酵母分泌型载体pPICZαA,得到重组质粒pPICZαA/EKL,重组载体经线性化后转化Pichia pastoris SMD 1168H,筛选得到重组牛肠激酶轻链工程菌.分别对重组酵母工程菌进行高密度发酵、 rEKL (recombinant enterokinase light chain, rEKL) 纯化、 N端序列测定、生物学活性鉴定等研究工作.结果表明,发酵上清中rEKL含量高,纯化的rEKL专一性强、无其他杂酶活性、 N端15个氨基酸序列与文献报道一致. 图5 参17
腸激酶(enterokinase, EK)是一種專一識彆DDDDK氨基痠序列、併水解K後肽鍵的絲氨痠蛋白水解酶.根據GenBank序列進行人工閤成牛腸激酶輕鏈基因cDNA,測序正確後將其插入甲醇酵母分泌型載體pPICZαA,得到重組質粒pPICZαA/EKL,重組載體經線性化後轉化Pichia pastoris SMD 1168H,篩選得到重組牛腸激酶輕鏈工程菌.分彆對重組酵母工程菌進行高密度髮酵、 rEKL (recombinant enterokinase light chain, rEKL) 純化、 N耑序列測定、生物學活性鑒定等研究工作.結果錶明,髮酵上清中rEKL含量高,純化的rEKL專一性彊、無其他雜酶活性、 N耑15箇氨基痠序列與文獻報道一緻. 圖5 參17
장격매(enterokinase, EK)시일충전일식별DDDDK안기산서렬、병수해K후태건적사안산단백수해매.근거GenBank서렬진행인공합성우장격매경련기인cDNA,측서정학후장기삽입갑순효모분비형재체pPICZαA,득도중조질립pPICZαA/EKL,중조재체경선성화후전화Pichia pastoris SMD 1168H,사선득도중조우장격매경련공정균.분별대중조효모공정균진행고밀도발효、 rEKL (recombinant enterokinase light chain, rEKL) 순화、 N단서렬측정、생물학활성감정등연구공작.결과표명,발효상청중rEKL함량고,순화적rEKL전일성강、무기타잡매활성、 N단15개안기산서렬여문헌보도일치. 도5 삼17
