分子植物育种
分子植物育種
분자식물육충
MOLECULAR PLANT BREEDING
2007年
5期
608-612
,共5页
黄永红%梅眉%曾继吾%周碧容%吴元立%易干军
黃永紅%梅眉%曾繼吾%週碧容%吳元立%易榦軍
황영홍%매미%증계오%주벽용%오원립%역간군
香蕉%ACO%植物表达载体%遗传转化
香蕉%ACO%植物錶達載體%遺傳轉化
향초%ACO%식물표체재체%유전전화
用限制性内切酶Xba Ⅰ和Sac Ⅰ从克隆载体pUCm-ACO上切下约1.2 kb的香蕉ACO基因,将其定向连接在经相同酶切的质粒载体pBI-121上,构建成植物表达载体pBI-aACO.在此基础上用EcoR Ⅰ和HindⅢ从在pBI-aACO上切下大小约2.3 kb的目的基因35Sp-aACO-NOSt,将其连接在质粒载体pCAMBI-A2301载体上,构建成香蕉ACO反义基因植物表达载体pCB-aACO.采用直接转化法将pCB-aACO导入根癌农杆菌菌株EHA105,采用该菌株转化普通烟草.在Kanamycin选择压力下获得的烟草转化不定芽和完整植株,经过GUS组织化学法检测、以及PCR和RT-PCR方法鉴定,验证了该植物表达载体的报告基因,选择基因和目的基因都得到了表达,证明该植物表达载体构建成功.此项研究为下一阶段用该反义基因转化香蕉品种以改良香蕉果实耐贮运性打下基础.
用限製性內切酶Xba Ⅰ和Sac Ⅰ從剋隆載體pUCm-ACO上切下約1.2 kb的香蕉ACO基因,將其定嚮連接在經相同酶切的質粒載體pBI-121上,構建成植物錶達載體pBI-aACO.在此基礎上用EcoR Ⅰ和HindⅢ從在pBI-aACO上切下大小約2.3 kb的目的基因35Sp-aACO-NOSt,將其連接在質粒載體pCAMBI-A2301載體上,構建成香蕉ACO反義基因植物錶達載體pCB-aACO.採用直接轉化法將pCB-aACO導入根癌農桿菌菌株EHA105,採用該菌株轉化普通煙草.在Kanamycin選擇壓力下穫得的煙草轉化不定芽和完整植株,經過GUS組織化學法檢測、以及PCR和RT-PCR方法鑒定,驗證瞭該植物錶達載體的報告基因,選擇基因和目的基因都得到瞭錶達,證明該植物錶達載體構建成功.此項研究為下一階段用該反義基因轉化香蕉品種以改良香蕉果實耐貯運性打下基礎.
용한제성내절매Xba Ⅰ화Sac Ⅰ종극륭재체pUCm-ACO상절하약1.2 kb적향초ACO기인,장기정향련접재경상동매절적질립재체pBI-121상,구건성식물표체재체pBI-aACO.재차기출상용EcoR Ⅰ화HindⅢ종재pBI-aACO상절하대소약2.3 kb적목적기인35Sp-aACO-NOSt,장기련접재질립재체pCAMBI-A2301재체상,구건성향초ACO반의기인식물표체재체pCB-aACO.채용직접전화법장pCB-aACO도입근암농간균균주EHA105,채용해균주전화보통연초.재Kanamycin선택압력하획득적연초전화불정아화완정식주,경과GUS조직화학법검측、이급PCR화RT-PCR방법감정,험증료해식물표체재체적보고기인,선택기인화목적기인도득도료표체,증명해식물표체재체구건성공.차항연구위하일계단용해반의기인전화향초품충이개량향초과실내저운성타하기출.
