CAJ | 학술논문

目的:探讨稳定转染基因Notch2短发夹状RNA (short hairpin RNA,shRNA) 对胶质瘤细胞株U251生长、增殖和凋亡的影响.方法:采用脂质体法将构建插入Notch2-shRNA和无意义shRNA(Negative-shRNA)的重组表达质粒分别转染人脑胶质瘤U251细胞,建立稳定长效转染的细胞株;应用RT-PCR和蛋白质印迹法检测Notch2-shRNA对U251细胞中Notch2表达的影响及相关蛋白表达的变化;MTT法检测其细胞增殖的影响;FCM法检测细胞凋亡率和细胞周期.结果:稳定转染Notch2-shRNA后,U215细胞中Notch2 mRNA和蛋白的表达明显受到抑制;干扰组细胞从第5天开始增殖明显降低(Ρ<0.05);干扰组细胞的凋亡率为(15.14±4.26)%,明显高于Negative-shRNA组的(2.70±1.45)%和未转染组的(2,10±1.72)%(P<0.05);Notch2-shRNA干扰组细胞S期细胞所占百分比为(23.1±3.4)%,明显低于转染Negative-shRNA组的(41.2±6.9)%和未转染组的(53.2±7.8)%(p<0.01),而干扰组G1期细胞所占百分率为(51.8±3.9)%,显著高于转染Negative-shRNA组的(38.9±9.7)%和未转染组的(25.2±7.7)%(P<0.05);与转染Negative-shRNA组和未转染组相比,干扰组细胞中p21和p27蛋白表达量上调,而细胞周期蛋白cyclinD1和微型染色体维持蛋白2(minichromosome maintenance 2 protein,MCM2)的表达量下调.结论:Notch2 shRNA能有效抑制U251细胞中Notch2的表达和细胞的增殖,为脑胶质瘤基因治疗提供了新的靶点.
목적:탐토은정전염기인Notch2단발협상RNA (short hairpin RNA,shRNA) 대효질류세포주U251생장、증식화조망적영향.방법:채용지질체법장구건삽입Notch2-shRNA화무의의shRNA(Negative-shRNA)적중조표체질립분별전염인뇌효질류U251세포,건립은정장효전염적세포주;응용RT-PCR화단백질인적법검측Notch2-shRNA대U251세포중Notch2표체적영향급상관단백표체적변화;MTT법검측기세포증식적영향;FCM법검측세포조망솔화세포주기.결과:은정전염Notch2-shRNA후,U215세포중Notch2 mRNA화단백적표체명현수도억제;간우조세포종제5천개시증식명현강저(Ρ<0.05);간우조세포적조망솔위(15.14±4.26)%,명현고우Negative-shRNA조적(2.70±1.45)%화미전염조적(2,10±1.72)%(P<0.05);Notch2-shRNA간우조세포S기세포소점백분비위(23.1±3.4)%,명현저우전염Negative-shRNA조적(41.2±6.9)%화미전염조적(53.2±7.8)%(p<0.01),이간우조G1기세포소점백분솔위(51.8±3.9)%,현저고우전염Negative-shRNA조적(38.9±9.7)%화미전염조적(25.2±7.7)%(P<0.05);여전염Negative-shRNA조화미전염조상비,간우조세포중p21화p27단백표체량상조,이세포주기단백cyclinD1화미형염색체유지단백2(minichromosome maintenance 2 protein,MCM2)적표체량하조.결론:Notch2 shRNA능유효억제U251세포중Notch2적표체화세포적증식,위뇌효질류기인치료제공료신적파점.