癌症高发区环境水样有机提取物诱导L-02细胞转化及其表观遗传学机制
암증고발구배경수양유궤제취물유도L-02세포전화급기표관유전학궤제
Transformation and epigenetic changes of L-02 cells by organic extracts of water environment
  • 万方数据
    癌变·畸变·突变 암변·기변·돌변
    CARCINOGENSES,TERATOGENSIS AND MUTAGENESIS
    2012年 3期 161-165 ,共5页

    张世鑫%邢秀梅%孙新%何民富%马璐%杨萍%肖勇梅%何志妮%李道传%张波%王庆%陈雯

    장세흠%형수매%손신%하민부%마로%양평%초용매%하지니%리도전%장파%왕경%진문

    有机污染物%细胞恶性转化%MGMT%高甲基化 有機汙染物%細胞噁性轉化%MGMT%高甲基化
    유궤오염물%세포악성전화%MGMT%고갑기화
    目的:检测华中某癌症高发地区环境水样有机提取物诱导人肝细胞系L-02细胞转化的能力,并初步探讨其诱导细胞转化的表观遗传学机制.方法:分别采集研究地区河水、离河较近(约1 km)及离河较远(约20 km)的浅井水(约10 m),用固相萃取方法提取其中的有机物.用台盼蓝染色计数法和单细胞凝胶电泳试验检测受试物的细胞毒性和致DNA损伤效应,以受试物对L-02细胞进行长期染毒并利用软琼脂克隆形成试验和裸鼠皮下成瘤试验检测受试物诱导L-02细胞转化的能力.采用甲基化特异性PCR(methylation specific PCR,MSP)技术检测转化细胞中O6-甲基鸟嘌呤- DNA甲基转移酶(O6-methylguanine-DNA methyltransferase,MGMT)基因启动子区甲基化状况,并分别用实时荧光定量PCR和Western blot技术检测转化细胞MGMTmRNA和蛋白的表达水平.结果:河水、离河较近的井水、离河较远的井水的有机提取物处理L-02细胞24h后,细胞存活率达70％的处理浓度分别为每毫升培养基30、150、200 ml原水,且均含有致DNA损伤的物质.以此作为最高剂量对细胞进行长期染毒,12周以后各处理组细胞软琼脂克隆形成试验和裸鼠皮下成瘤试验均显示转化特性.MSP结果显示转化细胞中MGMT基因启动子区发生高甲基化,与DMSO溶剂对照组比较,转化细胞中MGMTmRNA和蛋白表达水平均下调(P＜0.05).结论:研究地区环境水样有机提取物具有诱导L-02细胞转化的能力,MGMT基因启动子区的高甲基化可能参与有机物诱导的细胞转化过程.
    목적:검측화중모암증고발지구배경수양유궤제취물유도인간세포계L-02세포전화적능력,병초보탐토기유도세포전화적표관유전학궤제.방법:분별채집연구지구하수、리하교근(약1 km)급리하교원(약20 km)적천정수(약10 m),용고상췌취방법제취기중적유궤물.용태반람염색계수법화단세포응효전영시험검측수시물적세포독성화치DNA손상효응,이수시물대L-02세포진행장기염독병이용연경지극륭형성시험화라서피하성류시험검측수시물유도L-02세포전화적능력.채용갑기화특이성PCR(methylation specific PCR,MSP)기술검측전화세포중O6-갑기조표령- DNA갑기전이매(O6-methylguanine-DNA methyltransferase,MGMT)기인계동자구갑기화상황,병분별용실시형광정량PCR화Western blot기술검측전화세포MGMTmRNA화단백적표체수평.결과:하수、리하교근적정수、리하교원적정수적유궤제취물처리L-02세포24h후,세포존활솔체70％적처리농도분별위매호승배양기30、150、200 ml원수,차균함유치DNA손상적물질.이차작위최고제량대세포진행장기염독,12주이후각처리조세포연경지극륭형성시험화라서피하성류시험균현시전화특성.MSP결과현시전화세포중MGMT기인계동자구발생고갑기화,여DMSO용제대조조비교,전화세포중MGMTmRNA화단백표체수평균하조(P＜0.05).결론:연구지구배경수양유궤제취물구유유도L-02세포전화적능력,MGMT기인계동자구적고갑기화가능삼여유궤물유도적세포전화과정.
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