首都医科大学学报
首都醫科大學學報
수도의과대학학보
JOURNAL OF CAPITAL UNIVERSITY OF MEDICAL SCIENCES
2011年
3期
318-323
,共6页
常路丝%乔雍%魏洪莲%肖凡%郝晓花%张仁雯%成军%魏红山
常路絲%喬雍%魏洪蓮%肖凡%郝曉花%張仁雯%成軍%魏紅山
상로사%교옹%위홍련%초범%학효화%장인문%성군%위홍산
乙型肝炎病毒%c18orf54%细胞周期%发病机制
乙型肝炎病毒%c18orf54%細胞週期%髮病機製
을형간염병독%c18orf54%세포주기%발병궤제
目的 体外原核表达C18ORF54的重组蛋白,对其进行纯化,制备兔抗C18ORF54蛋白多克隆抗体,并对该重组蛋白对HepG2细胞可能的生物学作用进行初步研究.方法 应用反转录聚合酶链反应(reverse transcription PCR,RT-PCR)技术,以HepG2细胞总RNA为模板,反转录并扩增c18orf54目的基因片段,构建原核表达载体pET-32a(+)-c18orf54.转化大肠埃希菌BL21(DE3),异丙基β-D-硫代吡喃半乳糖(isopropyl β D thiogalacttpy ranoside,IPTG)诱导并通过十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium lauryl sulfate-polyacrylamide gol electrophoresis,SDS-PAGE)分析、免疫印迹(Western blotting)、生物质谱技术分析证实c18orf54重组蛋白表达正确.用Ni+亲和柱纯化表达蛋白.C18ORF54重组蛋白免疫新西兰兔,获得抗c18orf54蛋白的多克隆抗体.以纯化的C18ORF54蛋白为抗原,分别以免疫前后的新西兰兔血清作为第一抗体,利用Western blotting和酶联免疫吸附(enzyine linked immunosorbent assay,ELISA)法对多克隆抗体进行特异性分析及效价检测.将不同浓度范围的C18ORF54重组蛋白与培养的HepG2细胞共孵育,初步了解该重组蛋白对HepG2细胞可能的生物学作用.结果 PCR法扩增获得c18orf54基因片段,成功表达了C18ORF54重组蛋白,经SDS-PAGE和Western blotting分析得到证实.成功获得重组蛋白及抗C18ORF54多克隆抗体.ELISA检测证实多克隆抗体效价>1:320 000.结论 利用大肠埃希菌BL21(DE3)能够成功表达C18ORF54蛋白,获得高特异性、高效价兔抗C18ORF54重组蛋白的多克隆抗体,为今后研究C18ORF54蛋白的生物学特性奠定了基础.
目的 體外原覈錶達C18ORF54的重組蛋白,對其進行純化,製備兔抗C18ORF54蛋白多剋隆抗體,併對該重組蛋白對HepG2細胞可能的生物學作用進行初步研究.方法 應用反轉錄聚閤酶鏈反應(reverse transcription PCR,RT-PCR)技術,以HepG2細胞總RNA為模闆,反轉錄併擴增c18orf54目的基因片段,構建原覈錶達載體pET-32a(+)-c18orf54.轉化大腸埃希菌BL21(DE3),異丙基β-D-硫代吡喃半乳糖(isopropyl β D thiogalacttpy ranoside,IPTG)誘導併通過十二烷基磺痠鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(sodium lauryl sulfate-polyacrylamide gol electrophoresis,SDS-PAGE)分析、免疫印跡(Western blotting)、生物質譜技術分析證實c18orf54重組蛋白錶達正確.用Ni+親和柱純化錶達蛋白.C18ORF54重組蛋白免疫新西蘭兔,穫得抗c18orf54蛋白的多剋隆抗體.以純化的C18ORF54蛋白為抗原,分彆以免疫前後的新西蘭兔血清作為第一抗體,利用Western blotting和酶聯免疫吸附(enzyine linked immunosorbent assay,ELISA)法對多剋隆抗體進行特異性分析及效價檢測.將不同濃度範圍的C18ORF54重組蛋白與培養的HepG2細胞共孵育,初步瞭解該重組蛋白對HepG2細胞可能的生物學作用.結果 PCR法擴增穫得c18orf54基因片段,成功錶達瞭C18ORF54重組蛋白,經SDS-PAGE和Western blotting分析得到證實.成功穫得重組蛋白及抗C18ORF54多剋隆抗體.ELISA檢測證實多剋隆抗體效價>1:320 000.結論 利用大腸埃希菌BL21(DE3)能夠成功錶達C18ORF54蛋白,穫得高特異性、高效價兔抗C18ORF54重組蛋白的多剋隆抗體,為今後研究C18ORF54蛋白的生物學特性奠定瞭基礎.
목적 체외원핵표체C18ORF54적중조단백,대기진행순화,제비토항C18ORF54단백다극륭항체,병대해중조단백대HepG2세포가능적생물학작용진행초보연구.방법 응용반전록취합매련반응(reverse transcription PCR,RT-PCR)기술,이HepG2세포총RNA위모판,반전록병확증c18orf54목적기인편단,구건원핵표체재체pET-32a(+)-c18orf54.전화대장애희균BL21(DE3),이병기β-D-류대필남반유당(isopropyl β D thiogalacttpy ranoside,IPTG)유도병통과십이완기광산납-취병희선알응효전영(sodium lauryl sulfate-polyacrylamide gol electrophoresis,SDS-PAGE)분석、면역인적(Western blotting)、생물질보기술분석증실c18orf54중조단백표체정학.용Ni+친화주순화표체단백.C18ORF54중조단백면역신서란토,획득항c18orf54단백적다극륭항체.이순화적C18ORF54단백위항원,분별이면역전후적신서란토혈청작위제일항체,이용Western blotting화매련면역흡부(enzyine linked immunosorbent assay,ELISA)법대다극륭항체진행특이성분석급효개검측.장불동농도범위적C18ORF54중조단백여배양적HepG2세포공부육,초보료해해중조단백대HepG2세포가능적생물학작용.결과 PCR법확증획득c18orf54기인편단,성공표체료C18ORF54중조단백,경SDS-PAGE화Western blotting분석득도증실.성공획득중조단백급항C18ORF54다극륭항체.ELISA검측증실다극륭항체효개>1:320 000.결론 이용대장애희균BL21(DE3)능구성공표체C18ORF54단백,획득고특이성、고효개토항C18ORF54중조단백적다극륭항체,위금후연구C18ORF54단백적생물학특성전정료기출.
