CAJ | 학술논문

背景:星形胶质细胞被激活后表现出神经干细胞的特性,细胞表面的神经营养因子(表皮生长因子、睫状神经营养因子)受体超表达,通过改善复杂的内环境,有利于定向诱导神经干细胞向神经元的分化.目的:构建大鼠pSecTag2/Hygro B-EGF、pSecTag2/Hygro B-CNTF真核表达质粒,检测其在cos-7细胞中的共表达.方法:采用反转录-聚合酶链反应技术从大鼠颌下腺、坐骨神经组织总RNA中扩增出表皮生长因子、睫状神经营养因子基因功能区,将上述基因片段分别连接到真核表达载体pSecTag2/Hygro B,聚合酶链反应初步筛选、双酶切鉴定后送测序.将构建成功的两种重组载体单独及共转染cos-7细胞,Western blot法鉴定重组表皮生长因子、睫状神经营养因子蛋白的瞬时表达.结果与结论:反转录-聚合酶链反应结果证实成功获得大鼠表皮生长因子、睫状神经营养因子cDNA.DNA序列分析证实2种真核表达载体中的表皮生长因子、睫状神经营养因子序列与GenBank中目的序列一致.脂质体介导转染cos-7细胞48 h后,Western blot鉴定重组表皮生长因子、睫状神经营养因子蛋白在cos-7细胞中的表达,分别在Mr6 000,22 000处出现阳性条带.提示大鼠表皮生长因子、睫状神经营养因子基因的真核表达载体pSecTag2/Hygro B-EGF、pSecTag2/Hygro B-CNTF构建成功,共转染cos-7细胞后能够共表达重组表皮生长因子、睫状神经营养因子蛋白.
배경:성형효질세포피격활후표현출신경간세포적특성,세포표면적신경영양인자(표피생장인자、첩상신경영양인자)수체초표체,통과개선복잡적내배경,유리우정향유도신경간세포향신경원적분화.목적:구건대서pSecTag2/Hygro B-EGF、pSecTag2/Hygro B-CNTF진핵표체질립,검측기재cos-7세포중적공표체.방법:채용반전록-취합매련반응기술종대서합하선、좌골신경조직총RNA중확증출표피생장인자、첩상신경영양인자기인공능구,장상술기인편단분별련접도진핵표체재체pSecTag2/Hygro B,취합매련반응초보사선、쌍매절감정후송측서.장구건성공적량충중조재체단독급공전염cos-7세포,Western blot법감정중조표피생장인자、첩상신경영양인자단백적순시표체.결과여결론:반전록-취합매련반응결과증실성공획득대서표피생장인자、첩상신경영양인자cDNA.DNA서렬분석증실2충진핵표체재체중적표피생장인자、첩상신경영양인자서렬여GenBank중목적서렬일치.지질체개도전염cos-7세포48 h후,Western blot감정중조표피생장인자、첩상신경영양인자단백재cos-7세포중적표체,분별재Mr6 000,22 000처출현양성조대.제시대서표피생장인자、첩상신경영양인자기인적진핵표체재체pSecTag2/Hygro B-EGF、pSecTag2/Hygro B-CNTF구건성공,공전염cos-7세포후능구공표체중조표피생장인자、첩상신경영양인자단백.