生物医学工程与临床
生物醫學工程與臨床
생물의학공정여림상
BIOMEDICAL ENGINEERING AND CLINICAL MEDICINE
2012年
4期
390-394
,共5页
叶忠%张必利%徐荣良%雷军平%石秀英%陈挺%郑兴
葉忠%張必利%徐榮良%雷軍平%石秀英%陳挺%鄭興
협충%장필리%서영량%뢰군평%석수영%진정%정흥
PRKAG2基因%定点突变%pEGFP-N1载体%人
PRKAG2基因%定點突變%pEGFP-N1載體%人
PRKAG2기인%정점돌변%pEGFP-N1재체%인
目的 构建含有定点突变的人PRKAG2基因表达载体.方法 首先应用Trizol法抽提健康人全血mRNA,通过实时聚合酶链反应(RT-PCR)克隆得到野生型人PRKAG2 cDNA;继而通过聚合酶链反应(PCR)定点突变的方法获得突变型人PRKAG2基因,命名为G100S,最后应用酶切连接的方法得到重组载体pEGFP-G100S.结果 Trizol法提取人细胞mRNA,经RT-PCR合成cDNA第一条链,特异性引物PCR扩增得到PRKAG2基因片段,目的片段条带在1761 bp左右.分段克隆得到的G100S片段分别为300 bp与1500bp左右.转化Top10感受态细菌,PCR筛选阳性菌落5个克隆有3个克隆可见1800 bp左右的阳性片段,筛选得到pEGFP-G100S重组阳性克隆.测序证实重组载体pEGFP-G100S构建成功.结论 构建的含定点突变人PRKAG2基因重组载体pEGFP-G100S为进一步研究基因PRKAG2 G100S突变的功能奠定了基础.
目的 構建含有定點突變的人PRKAG2基因錶達載體.方法 首先應用Trizol法抽提健康人全血mRNA,通過實時聚閤酶鏈反應(RT-PCR)剋隆得到野生型人PRKAG2 cDNA;繼而通過聚閤酶鏈反應(PCR)定點突變的方法穫得突變型人PRKAG2基因,命名為G100S,最後應用酶切連接的方法得到重組載體pEGFP-G100S.結果 Trizol法提取人細胞mRNA,經RT-PCR閤成cDNA第一條鏈,特異性引物PCR擴增得到PRKAG2基因片段,目的片段條帶在1761 bp左右.分段剋隆得到的G100S片段分彆為300 bp與1500bp左右.轉化Top10感受態細菌,PCR篩選暘性菌落5箇剋隆有3箇剋隆可見1800 bp左右的暘性片段,篩選得到pEGFP-G100S重組暘性剋隆.測序證實重組載體pEGFP-G100S構建成功.結論 構建的含定點突變人PRKAG2基因重組載體pEGFP-G100S為進一步研究基因PRKAG2 G100S突變的功能奠定瞭基礎.
목적 구건함유정점돌변적인PRKAG2기인표체재체.방법 수선응용Trizol법추제건강인전혈mRNA,통과실시취합매련반응(RT-PCR)극륭득도야생형인PRKAG2 cDNA;계이통과취합매련반응(PCR)정점돌변적방법획득돌변형인PRKAG2기인,명명위G100S,최후응용매절련접적방법득도중조재체pEGFP-G100S.결과 Trizol법제취인세포mRNA,경RT-PCR합성cDNA제일조련,특이성인물PCR확증득도PRKAG2기인편단,목적편단조대재1761 bp좌우.분단극륭득도적G100S편단분별위300 bp여1500bp좌우.전화Top10감수태세균,PCR사선양성균락5개극륭유3개극륭가견1800 bp좌우적양성편단,사선득도pEGFP-G100S중조양성극륭.측서증실중조재체pEGFP-G100S구건성공.결론 구건적함정점돌변인PRKAG2기인중조재체pEGFP-G100S위진일보연구기인PRKAG2 G100S돌변적공능전정료기출.
