中国预防兽医学报
中國預防獸醫學報
중국예방수의학보
CHINESE JOURNAL OF PREVENTIVE VETERINARY MEDICINE
2012年
9期
697-701
,共5页
唐思静%刘惠莉%马勋%赵艳敏
唐思靜%劉惠莉%馬勛%趙豔敏
당사정%류혜리%마훈%조염민
大肠杆菌不耐热肠毒素%免疫原性%ADP-核酸转移酶
大腸桿菌不耐熱腸毒素%免疫原性%ADP-覈痠轉移酶
대장간균불내열장독소%면역원성%ADP-핵산전이매
为使大肠杆菌不耐热肠毒素(LT)的毒性丧失或减弱的同时仍保留其较强的免疫原性,本实验通过PCR和重叠-延伸PCR扩增,制备了突变体LTR72/G192的基因片段,经酶切和测序结果表明构建的表达载体pLTR72/G 192阅读框架正确,而且相应位点氨基酸获得了替换.IPTG诱导表达目的蛋白经SDS-PAGE电泳检测,表达出突变体重组蛋白为约30 ku和10ku的两个蛋白带,与LTA、LTB亚基分子量相吻合.Western blot检测结果表明两个蛋白亚基均可与His抗体发生特异性反应.目的蛋白经纯化后进行ADP-核酸转移酶试验及Patent-mouse毒性试验检测其酶活性与毒性,突变重组蛋白与野生型LT相比其酶活性和毒性均明显降低.纯化的目的蛋白与鸡新城疫病毒弱毒疫苗联合一起经滴鼻免疫鸡,ELISA结果显示,突变体LTR72/G192能辅助新城疫疫苗在血清和黏膜中产生较高滴度的抗新城疫病毒的IgG和IgA.
為使大腸桿菌不耐熱腸毒素(LT)的毒性喪失或減弱的同時仍保留其較彊的免疫原性,本實驗通過PCR和重疊-延伸PCR擴增,製備瞭突變體LTR72/G192的基因片段,經酶切和測序結果錶明構建的錶達載體pLTR72/G 192閱讀框架正確,而且相應位點氨基痠穫得瞭替換.IPTG誘導錶達目的蛋白經SDS-PAGE電泳檢測,錶達齣突變體重組蛋白為約30 ku和10ku的兩箇蛋白帶,與LTA、LTB亞基分子量相吻閤.Western blot檢測結果錶明兩箇蛋白亞基均可與His抗體髮生特異性反應.目的蛋白經純化後進行ADP-覈痠轉移酶試驗及Patent-mouse毒性試驗檢測其酶活性與毒性,突變重組蛋白與野生型LT相比其酶活性和毒性均明顯降低.純化的目的蛋白與鷄新城疫病毒弱毒疫苗聯閤一起經滴鼻免疫鷄,ELISA結果顯示,突變體LTR72/G192能輔助新城疫疫苗在血清和黏膜中產生較高滴度的抗新城疫病毒的IgG和IgA.
위사대장간균불내열장독소(LT)적독성상실혹감약적동시잉보류기교강적면역원성,본실험통과PCR화중첩-연신PCR확증,제비료돌변체LTR72/G192적기인편단,경매절화측서결과표명구건적표체재체pLTR72/G 192열독광가정학,이차상응위점안기산획득료체환.IPTG유도표체목적단백경SDS-PAGE전영검측,표체출돌변체중조단백위약30 ku화10ku적량개단백대,여LTA、LTB아기분자량상문합.Western blot검측결과표명량개단백아기균가여His항체발생특이성반응.목적단백경순화후진행ADP-핵산전이매시험급Patent-mouse독성시험검측기매활성여독성,돌변중조단백여야생형LT상비기매활성화독성균명현강저.순화적목적단백여계신성역병독약독역묘연합일기경적비면역계,ELISA결과현시,돌변체LTR72/G192능보조신성역역묘재혈청화점막중산생교고적도적항신성역병독적IgG화IgA.
