中国生物化学与分子生物学报
中國生物化學與分子生物學報
중국생물화학여분자생물학보
CHINESE JOURNAL OF BIOCHEMISTRY AND MOLECULAR BIOLOGY
2002年
2期
172-178
,共7页
骨髓%基质细胞%糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D%cDNA克隆
骨髓%基質細胞%糖基化燐脂酰肌醇特異性燐脂酶D%cDNA剋隆
골수%기질세포%당기화린지선기순특이성린지매D%cDNA극륭
为探讨人糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D(GPI-PLD)cDNA的结构及功能,应用RT-PCR从人骨髓基质细胞中克隆了长约2.6kb的GPI-PLD cDNA,包含完整阅读框架,编码23个氨基酸的信号肽及817个氨基酸的成熟肽.该cDNA与人胰腺GPI-PLD cDNA几乎百分之百同源,与人肝脏GPI-PLD cDNA同源性为95%,氨基酸同源性为94%,3者对应的结构基因只有1个,位于人类第6号染色体上,基因组序列长约80kb,包括25个外显子.构建克隆的GPI-PLD cDNA的真核表达载体,通过脂质体转染能表达GPI锚定的胎盘型碱性磷酸酶(PLAP)而无GPI-PLD活性的G9细胞,同时设立对照组检测GPI-PLD cDNA的功能.结果显示,对照组细胞几乎检测不到GPI-PLD活性,其表达的PLAP主要位于细胞膜上;而转染GPI-PLD cDNA的G9细胞能检测到较高水平的GPI-PLD活性,而且大部分酶活性存在于培养液中,其表达的PLAP也主要被释放入培养液.结果证实,从人骨髓基质细胞中克隆的GPI-PLD cDNA有生物学功能,它能释放细胞膜上GPI锚定蛋白质.
為探討人糖基化燐脂酰肌醇特異性燐脂酶D(GPI-PLD)cDNA的結構及功能,應用RT-PCR從人骨髓基質細胞中剋隆瞭長約2.6kb的GPI-PLD cDNA,包含完整閱讀框架,編碼23箇氨基痠的信號肽及817箇氨基痠的成熟肽.該cDNA與人胰腺GPI-PLD cDNA幾乎百分之百同源,與人肝髒GPI-PLD cDNA同源性為95%,氨基痠同源性為94%,3者對應的結構基因隻有1箇,位于人類第6號染色體上,基因組序列長約80kb,包括25箇外顯子.構建剋隆的GPI-PLD cDNA的真覈錶達載體,通過脂質體轉染能錶達GPI錨定的胎盤型堿性燐痠酶(PLAP)而無GPI-PLD活性的G9細胞,同時設立對照組檢測GPI-PLD cDNA的功能.結果顯示,對照組細胞幾乎檢測不到GPI-PLD活性,其錶達的PLAP主要位于細胞膜上;而轉染GPI-PLD cDNA的G9細胞能檢測到較高水平的GPI-PLD活性,而且大部分酶活性存在于培養液中,其錶達的PLAP也主要被釋放入培養液.結果證實,從人骨髓基質細胞中剋隆的GPI-PLD cDNA有生物學功能,它能釋放細胞膜上GPI錨定蛋白質.
위탐토인당기화린지선기순특이성린지매D(GPI-PLD)cDNA적결구급공능,응용RT-PCR종인골수기질세포중극륭료장약2.6kb적GPI-PLD cDNA,포함완정열독광가,편마23개안기산적신호태급817개안기산적성숙태.해cDNA여인이선GPI-PLD cDNA궤호백분지백동원,여인간장GPI-PLD cDNA동원성위95%,안기산동원성위94%,3자대응적결구기인지유1개,위우인류제6호염색체상,기인조서렬장약80kb,포괄25개외현자.구건극륭적GPI-PLD cDNA적진핵표체재체,통과지질체전염능표체GPI묘정적태반형감성린산매(PLAP)이무GPI-PLD활성적G9세포,동시설립대조조검측GPI-PLD cDNA적공능.결과현시,대조조세포궤호검측불도GPI-PLD활성,기표체적PLAP주요위우세포막상;이전염GPI-PLD cDNA적G9세포능검측도교고수평적GPI-PLD활성,이차대부분매활성존재우배양액중,기표체적PLAP야주요피석방입배양액.결과증실,종인골수기질세포중극륭적GPI-PLD cDNA유생물학공능,타능석방세포막상GPI묘정단백질.
