河北农业大学学报
河北農業大學學報
하북농업대학학보
JOURNAL OF AGRICULTURAL UNIVERSITY OF HEBEI
2011年
3期
18-23
,共6页
曹志艳%温雷蕾%李静宜%陈晓旭%王作英%董金皋
曹誌豔%溫雷蕾%李靜宜%陳曉旭%王作英%董金皋
조지염%온뢰뢰%리정의%진효욱%왕작영%동금고
玉米大斑病菌%DHN黑色素%真核表达
玉米大斑病菌%DHN黑色素%真覈錶達
옥미대반병균%DHN흑색소%진핵표체
本研究在克隆获得玉米大斑病菌1,3,8-三羟基萘还原酶基因(St3HNR)的基础上,拟对该基因编码产物进行异源表达分析,明确基因功能.试验利用毕赤酵母真核表达系统,构建了玉米大斑病菌St3HNR基因的真核表达载体pPIC9K-St3HNR,采用电击转化法将重组质粒转入表达宿主菌GS115中得到了重组酵母菌株,经甲醇诱导表达,SDS-PAGE检测发现,从诱导48 h开始有一个分子量约为28 kD的蛋白组分分泌,与St3HNR的编码产物分子量相近,且表达量随诱导时间的延长而逐渐增加,而对照及未诱导菌株中不存在该条带,推测St3hnr蛋白在宿主菌中分泌表达.该研究为进一步分析基因编码产物的催化活性,明确该基因在黑色素合成途径中的作用奠定了基础.
本研究在剋隆穫得玉米大斑病菌1,3,8-三羥基萘還原酶基因(St3HNR)的基礎上,擬對該基因編碼產物進行異源錶達分析,明確基因功能.試驗利用畢赤酵母真覈錶達繫統,構建瞭玉米大斑病菌St3HNR基因的真覈錶達載體pPIC9K-St3HNR,採用電擊轉化法將重組質粒轉入錶達宿主菌GS115中得到瞭重組酵母菌株,經甲醇誘導錶達,SDS-PAGE檢測髮現,從誘導48 h開始有一箇分子量約為28 kD的蛋白組分分泌,與St3HNR的編碼產物分子量相近,且錶達量隨誘導時間的延長而逐漸增加,而對照及未誘導菌株中不存在該條帶,推測St3hnr蛋白在宿主菌中分泌錶達.該研究為進一步分析基因編碼產物的催化活性,明確該基因在黑色素閤成途徑中的作用奠定瞭基礎.
본연구재극륭획득옥미대반병균1,3,8-삼간기내환원매기인(St3HNR)적기출상,의대해기인편마산물진행이원표체분석,명학기인공능.시험이용필적효모진핵표체계통,구건료옥미대반병균St3HNR기인적진핵표체재체pPIC9K-St3HNR,채용전격전화법장중조질립전입표체숙주균GS115중득도료중조효모균주,경갑순유도표체,SDS-PAGE검측발현,종유도48 h개시유일개분자량약위28 kD적단백조분분비,여St3HNR적편마산물분자량상근,차표체량수유도시간적연장이축점증가,이대조급미유도균주중불존재해조대,추측St3hnr단백재숙주균중분비표체.해연구위진일보분석기인편마산물적최화활성,명학해기인재흑색소합성도경중적작용전정료기출.
