中国实验血液学杂志
中國實驗血液學雜誌
중국실험혈액학잡지
JOURNAL OF EXPERIMENTAL HEMATOLOGY
2011年
3期
706-710
,共5页
杨景辉%吴勇%字友梅%李先芳%廖晓莹%陈元仲
楊景輝%吳勇%字友梅%李先芳%廖曉瑩%陳元仲
양경휘%오용%자우매%리선방%료효형%진원중
hβc基因%慢病毒%NB4细胞%IL-3%GM-CSF
hβc基因%慢病毒%NB4細胞%IL-3%GM-CSF
hβc기인%만병독%NB4세포%IL-3%GM-CSF
本研究旨在通过慢病毒介导的基因转移方法,使 NB4 细胞稳定过表达hβc基因,观察过表达hβc基因的NB4细胞在IL-3或GM-CSF作用下分化行为的改变,探讨hβc基因与NB4细胞分化之间的关系.以本实验室前期构建的携带hβc基因ORF的克隆质粒为模板,用带PmeI和BstBI酶切位点的引物PCR获得目的基因,酶切PCR产物,定向克隆至慢病毒载体pRRLSIN.ePPT.PGK/IRES/GFP.WPRE,构建含hβc基因的慢病毒载体,经酶切及测序鉴定其正确性,将构建好的重组质粒与包装质粒一起共转染293T细胞,收集培养液上清,感染NB4细胞.用Western blot鉴定目的基因在NB4细胞中的表达情况.以转染空载体慢病毒的NB4细胞(简称NB4-blank细胞)为对照,观察过表达hβc基因的NB4细胞(简称NB4-hβc细胞)在IL-3、GM-CSF、全反式维甲酸(ATRA)作用下分化行为的改变.结果表明:含有hβc基因的重组慢病毒载体能高效转染NB4细胞,并使NB4细胞稳定过表达hβc基因.NB4-hβc细胞,在IL-3或GM-CSF作用下CD11b表达水平上调,但上调的幅度均低于ATRA作用下的上调幅度.且未观察到形态学改变.NB4一Blank细胞在IL-3或GM-CSF作用下CD11b表达水平无明显变化.结论:通过慢病毒介导的基因转移方法,成功地使NB4细胞稳定过表达忸基因,IL-3或GM-CSF在一定程度上能诱导过表达hβc基因的NB4细胞向中性粒细胞分化,但不能使其完全分化成熟.
本研究旨在通過慢病毒介導的基因轉移方法,使 NB4 細胞穩定過錶達hβc基因,觀察過錶達hβc基因的NB4細胞在IL-3或GM-CSF作用下分化行為的改變,探討hβc基因與NB4細胞分化之間的關繫.以本實驗室前期構建的攜帶hβc基因ORF的剋隆質粒為模闆,用帶PmeI和BstBI酶切位點的引物PCR穫得目的基因,酶切PCR產物,定嚮剋隆至慢病毒載體pRRLSIN.ePPT.PGK/IRES/GFP.WPRE,構建含hβc基因的慢病毒載體,經酶切及測序鑒定其正確性,將構建好的重組質粒與包裝質粒一起共轉染293T細胞,收集培養液上清,感染NB4細胞.用Western blot鑒定目的基因在NB4細胞中的錶達情況.以轉染空載體慢病毒的NB4細胞(簡稱NB4-blank細胞)為對照,觀察過錶達hβc基因的NB4細胞(簡稱NB4-hβc細胞)在IL-3、GM-CSF、全反式維甲痠(ATRA)作用下分化行為的改變.結果錶明:含有hβc基因的重組慢病毒載體能高效轉染NB4細胞,併使NB4細胞穩定過錶達hβc基因.NB4-hβc細胞,在IL-3或GM-CSF作用下CD11b錶達水平上調,但上調的幅度均低于ATRA作用下的上調幅度.且未觀察到形態學改變.NB4一Blank細胞在IL-3或GM-CSF作用下CD11b錶達水平無明顯變化.結論:通過慢病毒介導的基因轉移方法,成功地使NB4細胞穩定過錶達忸基因,IL-3或GM-CSF在一定程度上能誘導過錶達hβc基因的NB4細胞嚮中性粒細胞分化,但不能使其完全分化成熟.
본연구지재통과만병독개도적기인전이방법,사 NB4 세포은정과표체hβc기인,관찰과표체hβc기인적NB4세포재IL-3혹GM-CSF작용하분화행위적개변,탐토hβc기인여NB4세포분화지간적관계.이본실험실전기구건적휴대hβc기인ORF적극륭질립위모판,용대PmeI화BstBI매절위점적인물PCR획득목적기인,매절PCR산물,정향극륭지만병독재체pRRLSIN.ePPT.PGK/IRES/GFP.WPRE,구건함hβc기인적만병독재체,경매절급측서감정기정학성,장구건호적중조질립여포장질립일기공전염293T세포,수집배양액상청,감염NB4세포.용Western blot감정목적기인재NB4세포중적표체정황.이전염공재체만병독적NB4세포(간칭NB4-blank세포)위대조,관찰과표체hβc기인적NB4세포(간칭NB4-hβc세포)재IL-3、GM-CSF、전반식유갑산(ATRA)작용하분화행위적개변.결과표명:함유hβc기인적중조만병독재체능고효전염NB4세포,병사NB4세포은정과표체hβc기인.NB4-hβc세포,재IL-3혹GM-CSF작용하CD11b표체수평상조,단상조적폭도균저우ATRA작용하적상조폭도.차미관찰도형태학개변.NB4일Blank세포재IL-3혹GM-CSF작용하CD11b표체수평무명현변화.결론:통과만병독개도적기인전이방법,성공지사NB4세포은정과표체뉴기인,IL-3혹GM-CSF재일정정도상능유도과표체hβc기인적NB4세포향중성립세포분화,단불능사기완전분화성숙.
